13
.
制作标准曲线及样品测定
取6支50 mL具塞比色管，分别按下表的量加入亚硝酸态氮标准使 用液（Vs ），加无氨纯水至标线，混匀
管号
1
N
O
2
-N
/（mg/L）
0
2
3
4
5
6
0.010 0.020 0.040 0.080 水样
VS /mL
0
0.50 1.00 2.00 4.00 V水样
分别加入1.0 mL磺胺溶液 混匀
冷却后加入
玻棒研磨
酚二磺酸试剂1.0 mL 放置片刻
再研磨一次 放置10 min
加10ml纯水
410 nm处比色
转移至比色管
定容至标线
21
溶液呈黄色
加3~4mL
氢氧化钠
.
样品测定 将过滤后的水样50.0 mL置于干燥的蒸发皿内，以氢氧
化钠溶液调节pH至微碱性（pH≈8），置水浴上蒸发至干。
冷却后加入
7
.
（五）结果计算与分析
A
氨氮标准曲线（纳氏法）2005.04.20 责任人：×××
0.250 0.200 0.150 0.100 0.050
淡水 海水
测定条件： 22℃ 7230分光 420nm 10mm比色皿
海水 A = 0.1937ρ + 0.0028
R 2 = 0.9991 试剂空白A 0 = 0.008
16
.
（一）实验目的
了解养殖水体硝酸盐的垂直分布特点 掌握硝酸盐测定的方法——酚二磺酸法
17
.
（二）实验原理
硝酸盐在无水情况下与酚二磺酸反应，生 成黄色的硝基二磺酸酚，溶解后溶液在 410nm处吸光度与硝酸氮的含量呈线性关系。
18
.
（三）仪器与试材
仪器
瓷蒸发皿 水浴锅 玻璃漏斗 50 mL具塞比色管 分光光度计 比色皿等
试剂
♪ 酚二磺酸
♪ 氢氧化钠溶液
♪ 硝酸盐氮贮备标准溶液
♪ 硫酸银溶液
♪ EDTA二钠溶液
♪ 氢氧化铝混悬液等
19
.
（四）主要操作步骤
样品预处理（凝聚法）
200 mL水样
2 mL氢氧化铝悬浮液
于250 mL锥形瓶
中性滤纸过滤
弃去最初滤出 的25 mL滤液
20
.
制作标准曲线制作（由老师负责完成）
仪器
分光光度计及配套比色皿 50mL具塞比色管 容量瓶 移液管
试剂
♪ 磺胺溶液 ♪ 盐酸萘乙二胺溶液 ♪ 亚硝酸盐氮贮备溶液 ♪ 亚硝酸盐氮使用溶液 ♪ 氢氧化铝悬浮液12Biblioteka .（四）主要操作步骤
样品预处理（凝聚法）
200 mL水样
2 mL氢氧化铝悬浮液
于250 mL锥形瓶
中性滤纸过滤
弃去最初滤出 的25 mL滤液
9
.
（一）实验目的
掌握水样预处理方法、亚硝酸氮的测定方 法以及同一养殖水体中亚硝酸氮与氨氮和 硝酸氮之间含量大小的关系。
10
.
（二）实验原理
在酸性介质中亚硝酸盐与磺胺进行重氮化反 应，其产物再与盐酸萘乙二胺偶合生成红色 偶氮染料，该染料在波长543 nm附近有最大 吸收。
11
.
（三）仪器与试材
分别加入1.0 mL 盐酸萘乙二胺溶液
混匀 显色15 min
543 nm处比色
溶液呈红色
14
.
（五）结果分析与计算
15
.
三、硝酸氮的测定-酚二磺酸比色法
Determination of nitrate nitrogen -Spectrophotometric method with phenol disulfonic acid
6.00
10.0 0
V水样
加入1.0mL酒石酸钾钠溶液
混匀 加入1.0 mL纳氏试剂
混匀 显色10 min
420 nm处比色
溶液呈黄色
.
6
实验注意事项
本方法只能用于较清洁的水样，污水需采 用蒸馏发将氨分离收集后再加纳氏试剂比 色
鱼池水常有色且浑浊，多数是由于水中生 物或泥沙所造成，经Zn(OH)2 吸附处理后， 一般可用此法测定
原理和操作方法
3
.
（二）实验原理
纳氏试剂是碘化汞钾（K2HgI4）的强碱性溶液，它能与氨 氮反应生成棕色的难溶络合物，浓度很小时，在水中以胶 态形式存在，呈现为橙黄色。反应如下式所示：
4
.
（三）主要操作步骤
样品预处理（凝聚法）
弃去最初 滤出的25 mL滤液
200 mL水样
2.0 mL硫酸锌溶液
在 6个清洁、干燥的蒸发皿内分别移入硝酸盐氮标准使用液0、 0.50、1.00、2.00、3.00 、5.00 mL，以氢氧化钠溶液调节pH至微碱 性（pH≈8），置水浴上蒸发至干。
管号
1
2
3
4
5
6
ρ/(mg/L) 0 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00
VS /mL 0 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00
于250 mL锥形瓶
中性滤纸过滤
2~3滴NaOH溶液
5
.
标准曲线及样品的制作与测定
取6支50 mL具塞比色管，分别按下表的量加入氨氮标准使用 液（Vs ），加无氨纯水至标线，混匀
管号
1
T/（NH3m-Ng/L） 0
23456 0.40 0.80 1.20 2.00 水样
VS /mL
0
2.00
4.00
淡水 A = 0.1866ρ + 0.0029
R 2 = 0.999 试剂空白A 0 = 0.007
0.000 0.000 0.200 0.400 0.600 0.800 1.000 1.200 1.400
氨氮ρ /(mg/L)
8
.
二、亚硝酸态氮的测定
Spectrophotometric method with sulphanilamide and coupling with N(1-naphthyl)-ethylenediamine
玻棒研磨
酚二磺酸试剂1.0 mL 放置片刻
再研磨一次 放置10 min
转移至比色管
410 nm处比色
溶液呈黄色 定容至标线
加10ml纯水
加3~4mL
氢氧化钠
所有实验组水样集中比色
22
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（五）结果分析与计算
23
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实验七 水体氨态氮、亚硝态氮 和硝态氮的测定
1
.
一、氨态氮的测定—纳氏试剂法
Nessler's reagent Spectrophotometric
实验目的 实验原理 实验仪器和试剂
主要操作步骤 结果与计算 结果分析
2
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（一）实验目的
复习分光光度计的使用 学习其中一种比色法测定水中氨氮含量的