人类免疫缺陷病毒抗体检测ELISA
原理
在微孔条上预包被纯化基因工程人类免疫缺陷病毒I型和II型（HIV-1/HIV-2）抗原（合成肽或基因重组蛋白），采用双抗原夹心法检测血清或血浆中人类免疫缺陷病毒抗体。
样品加入包被抗原反应孔，在随后的温育过程中，若样品中含特异抗体，则该抗体与包被抗原形成抗原抗体复合物被吸附到固相，再加入酶标记的HIV-1/HIV-2抗原，最终形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，洗涤除去未结合的游离酶，加入显色剂后显色。
标本采集
2.1采集前病人准备：受检者应空腹
2.2标本种类：血清或血浆
2.3标本要求：采集病人静脉血2ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
标本储存：2-8°C保存不应超过48小时，-20°C不应超过3个月，-70°C长期保存，应避免反复冻融。
标本运输：密封，室温运输。
标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
试剂
6.1试剂名称：人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒
6.2试剂生产厂家：珠海丽珠试剂有限公司。
6.3包装规格：96Test/Kit
6.4试剂盒组成：包被反应板，HIV酶标记物，阳性对照血清，阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，密封袋。
试剂储存条件及有效期：2-8°C避光保存，有效期6个月。
仪器设备
仪器名称：自动酶标仪
仪器厂家：Rayto
仪器型号：RT-2100C
操作步骤
平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25°C），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。
编号：将微孔条固定于支架，按序编号。
加样：用加样器在微孔反应条板孔中加入样品50μl；空白孔不加任何液体；阴性对照孔和阳性对照孔，每孔分别加入阴阳对照各50μl，标好位置。
对照应在所有标本加完以后再加，以保证阈值准确性。
温育（一）：充分混匀，加上封板膜，置37℃温育30分钟。
洗涤（一）：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
加酶：分别在每孔中加入酶标记物50μl，轻拍混匀。
温育（二）：充分混匀，加上封板膜，置37℃温育30分钟。
洗涤（二）：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.10显色：每孔加入底物A、B各50μl，轻拍混匀，置37℃暗处20分钟。
8.11终止：每孔加终止液50μl，混匀。
8.12测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。
结果判断与分析
临界值（C.O.）的计算：临界值＝0.15＋阴性对照平均OD值。
结果判定：样品OD值S/C.O>=1者为阳性
样品OD值S/C.O<1者为阴性
正常时，阴性对照OD值应<=0.12，阳性对照OD值应>=0.80，
阴性对照若小于0.08以0.08计算。
若阳性对照OD值超出正常范围或其孔间之差大于30%，应重复试验。
初次试验阳性者应重新取样进行双孔复试，按全国HIV检测管理规范的要求，须将血样或重新采血送HIV确认实验室做确认试验，确认报告阴性者，血可以发放使用；凡确认实验阳性和可疑者，血不能发放使用，统一送确认实验室处理。
质量控制：每次测定均做双孔或以上复试；阴阳对照OD值应在要求范围内。
参考范围：阴性
12.临床意义：在血清中HIV抗体的存在表明可能有人类免疫缺陷病毒感染。
13.操作性能：灵敏度、特异性高。
14.方法局限性
14.1只能用作HIV抗体检测的初筛试验。
14.2样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定正相关。
15.病危报警值的处理：初次试验阳性者应重新取样进行双孔复试，按全国HIV检测管理规范的要求，须将血样或重新采血送HIV确认实验室做确认试验；通知防保科和临床申请医生。
16.注意事项
16.1试剂的使用：整个检测工作必须符合《全国艾滋病检测工作规范》中应严格防止交叉感染，操作时必须带手套，穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度。
所有样品，洗弃液和各种废弃物都应按传染物处理。
16.2HIV-1/HIV-2抗体测定结果的判定必须以酶标仪读数为准。
16.3样品、酶结合物溶液等应用加液器加注，并经常校对其准确性。
16.4洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗静。
16.5所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
16.6微孔板条从冷藏环境中取出时应在室温中平衡至潮气干尽方可使用；未用完者须放入有干燥剂的密封袋中保存。
16.7用于检测的样品应保持新鲜。
16.8剩余样品及废弃物应经121摄氏度高压蒸汽灭菌30分钟，或用5.0g/l次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。
16.9不同批号的试剂组分不可混用。
16.10本试剂的使用单位必须是经当地卫生行政部门批准的HIV初筛实验室；使用人员必须是经过培训的指定人员。
17.当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所
有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。
18.参考文献：中华人民共和国卫生部医政司编。
全国临床检验操作规程（第二版）。
19.其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格“防伪标签的试剂。