：梯度时间；F：流速； ：死体积； ：梯度变化范围。
常见问题和维护：
整个液相系统最值得关注的常数：压力
除体系受到污染之外，几乎所有柱前的问题都能在压力变化上表现出来。
压力来源：泵上的压力传感器
最常见的问题：
压力小（几乎为零）：说明没有流动相流过柱子。
可能原因：
柱前漏夜
流速设为0了
流动相干了
吸滤头没有放流动相液面之下
频繁出现的气泡会影响到流路的延续性，应该注意。吸滤头堵，管路脏（通常是水相）有可能带来频繁出现的气泡。可以先A，B的溶剂瓶调换一下。PURGE三五次。后换回来，再PURGE两次。清洗一下管路。
压力过大：说明流路堵了
逐段排查，先从柱（预柱）前接口（因为柱子最易堵某一段堵了（通常是柱子）。换柱子（或预柱）。
换针：
调针位：
调针位：
设定洗针体积：
一些小概念：
PEEK：聚醚醚酮
色谱管道，外径多为1/16inch，1inch=2.54cm，1/16in=2.54cm，内径大小以颜色标准，红色（我们用的）最小，为0.13mm（应该是国际统一标准）
PEEK接头手紧即可
不锈钢接头要用工具紧
接头分一体的和分为主体和压紧环两部分的。后者在拧紧的过程中，不易带动管道扭曲变形。
可能原因：泵体内有气泡，泵头单向阀坏。
先确认是哪一台泵有问题。先走100%A相。看是否压力还是波动大，还大则说明A泵有问题。压力正常则说明A泵正常。再走100%的B相，过程如上。
确认好泵之后，先purge一下，以驱赶气泡。Purge两次后，还是压力波动大，这有可能单向阀坏了，需要清洗或更换。
Ctc自动进样器的常用维护操作（实验室现场操作）：
也可能进样过程有问题，注意观察进样针活塞是否推到底。可能由于流通阀堵塞，造成压力大，进样针没法推到底。
重现性不好：
内标波动大，可能喷雾针脏了，使得喷雾不均匀。可能是液相方法没有开发好。峰型差，峰太宽都有可能造成面积不重复（不会差别太大）。
注意观察重现性不好的那几针，是否峰型比较特殊，保留时间也有较大变化，如果是，很有可能是由于pump里进了气泡，造成流速不稳，这点可以从压力变化得到确认，但是好像没法记录压力曲线。
梯度方法的建立：
Rs：分离度，表示两峰分离程度的物理量。
k：容量因子，表示某溶质在固定相和流动相中物质的量的比，在等度洗脱中。一种物质的k值是恒定不变的。上面两试针对的是梯度洗脱， 表示的平均容量因子。
a：分离因子，两个溶质的容量因子的比。通常k大的作为分子。表示两物质分离能力的大小。
N：理论塔板数，表示柱子的分离能力，也就是柱效。
= W
W=1.70
=0.7则W=0.7*1.70=1.19
差不多刚好实现单位质荷比的分离
线性范围：
信号强度与样品浓度的关系可用如下关系式表示：R=ARCX。R为信号强度大小，AR为响应因子。C为样品浓度，X为指数。X=1，表示在线性范围之内，考虑到实验误差等因素。一般只要X在0.98-1.92之间，就认为还在线性范围之内。线性范围是一个浓度范围，下限比较难测。通常就以最小检测量或最小检测浓度作为线性范围的下限。
不锈钢的压紧环是一次性的
单位换算：
1MPa=10bar=7500.6torr=14.5psi
Psi：pound per square inch (psi)
Torr：托里彻利，标准大气压的1/760。也就是mmHg（毫米汞柱）
其它问题：
残留大：
很可能是洗针过程有问题，注意观洗针时有没有抽上液体，抽上来的液体是否有很多气泡。出现过由于转子磨损，洗针液不能顺畅流出进样口。造成洗针不充分。清洗或更换转子。
流路中有大段气泡：
通过大流速（如5ml/min）冲洗可以去除泵体内气泡。也就是常说的PURGE。按下泵的面板上的purge键即可。每次PURGE的时间和流速可以在面板上设定。通常不改。初始值应该是5ml/min，3min。
但有时候泵体内空气太多，purge都不可以，或者很难抽上流动相，这是可以在purge的同时，用注射器，在泵的废液出口处抽。直到没有气泡。
死时间(dead time，t0)--不保留组分的保留时间。即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。在反相HPLC中可用苯磺酸钠来测定死时间。
死体积(dead volume，V0)--由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。它包括4部分：进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙（被流动相占据，Vm）、柱出口管路体积、检测器流动池体积。其中只有Vm参与色谱平衡过程，其它3部分只起峰扩展作用。为防止峰扩展，这3部分体积应尽量减小。V0＝F×t0（F为流速）
质谱检测器的色谱图：chromatogram，强度和时间的图。等同于紫外检测的色谱图。
质谱检测器的光谱图：spectrum，某一时间点（段时间内平均）的强度相对质荷比的图
下图上半为一色谱图，下半部为图是灰色方块（2.5min左右）内，平均强度相对质荷比的光谱图。类似于紫外中的全波长图。
分辨率：unit分辨率定义为半峰宽为0.7。其意义如下：
流路中有大段气泡
处理方法：
漏液：从泵的出口到柱子的前端接口（柱后漏液几乎不会影响压力值）顺次检查。泵上有自己的漏液传感器。检测到漏液。会停止工作并蜂鸣，变红。同时显示错误信息：ERROR：LEAK DETECTED。发现漏液点，先停泵，重新接好。将漏液擦干。
有的漏液不明显，这时压力的也不会太小，检查时要注意，可用手仔细摸各个接口，感觉是否湿冷。
压力还高：说明是柱前某段堵了。
这时再将进样器出口（接柱子）的peek管接头拧下：
压力正常：说明是这段peek管堵了。换peek管。
压力还高：说明是进样器之前的部分堵了。通常是进样器六通阀堵了。反冲或清洗流通阀。
其它部分依次类推。
压力波动大：说明流路中的液流不平稳，这时色谱图通常保留时间不稳定，峰型也不好。得到的线性，重复性也不会好。
关于偶尔出现的气泡，不用太过在意，因为：
1.有脱气机在。
2.在purge时，由于流速太大，难免会出现气泡。尤其是在purge阀开超过180度，废液出口处出现气泡就跟平常了。
3.只要气泡不在泵腔内堆积，就几乎不会影响到分析结果。只要出了泵口，在高压下会
被压缩的很小。不影响流路的延续性。
所以，只要观察压力变化，如果压力没有异常波动，就行。在泵体内有气泡堆积时，压力波动会变大。什么样的波动算正常，需要大家注意观察。根究经验，在以恒定流速，梯度不变时，面板上以MP为单位的显示值应该几乎不变。