色谱柱知识讲解
主要内容
正相 色谱 反相 离子对 色谱
色谱
色谱
亲水作 用色谱
凝胶 色谱
正相色谱
固定相极性大于流动相极性 流动相是弱极性:如正己烷、石油醚等 固定相是有极性:布满硅羟基的硅胶
极性大的化合物 极性小的化合物
固定相(极性大) 流动相(极性小)
出峰慢 出峰快
反相色谱
流动相极性大于固定相极性 流动相是强极性:如甲醇、水
固定相是若极性:十八烷基键合硅胶柱,也叫C18 柱,就是把硅胶上原本的硅羟基变成了一条碳十八 的长链。
1、反相色谱的流动相不再需要烃类、氯仿这些 更危险的有机溶剂,使用起来更加简单和安全。 2、而极性强的化合物由于分子间作用力更强, 往往沸点不低,不适合用气相分析,更适合用反 相液相色谱分析
1、反相色谱的流动相有更多的参数选择:PH、缓冲盐种类、浓 度等,能更好地调整分离效果,而正相色谱可调整的流动相参数 非常有限
亲水作用色谱HILIC模式
测定糖类?
糖极性很强
用正相:不能溶解在正己烷等非极性流动相中 用反相:糖和C18没有相互作用,出峰太快,无法分离
近几年关于LCMS的HILIC应用研究非常热门,它使用类似于 正相的色谱柱,比如硅胶,和传统反相的流动相,比如乙腈 /水 这样的组合即能够溶解样品,又能够保留样品,最终使样品 得到很好的分离。
ห้องสมุดไป่ตู้
离子对色谱
又叫离子交换色谱
适用:化合物极性特别强, 一言不合就电离
原理:可增强离子和固定相 的相互作用,使不同的化合 物得到分离
凝胶色谱
又叫体积排阻色谱
不管是正相、反相还是离子交换色谱,化合物出峰的情况都是和极性相 关的,而凝胶色谱的出峰却只和化合物的大小有关,所以也叫体积排阻 色谱。
1、当样品流经凝胶色谱柱时,直径较大的化合物,不易进入凝 胶颗粒的微孔中,所以很快出峰。/2、而直径较小的化合物会进 入凝胶颗粒的微孔中,并不断的进出和扩散,因此,较晚出峰。
1、当样品流经凝胶色谱柱时,直径较大的化合物,不易进入凝 胶颗粒的微孔中,所以很快出峰。/2、而直径较小的化合物会进 入凝胶颗粒的微孔中,并不断的进出和扩散,因此,较晚出峰。