Ⅳ、植物组织中可溶性糖含量的测定（蒽酮法）
一、目的
掌握蒽酮法测定糖的原理和技术。

二、原理
糖类（包括单糖、双糖、寡糖）在浓硫酸存在下，脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，然后蒽酮与糠醛或羟甲基糠醛经脱水缩合，生成蓝绿色的糠醛衍生物，颜色深浅与糖浓度成正相关。

其反应式如下：
显色反应与反应温度、加热时间、反应系统中水和硫酸比例有关。

本实验通过控制反应系统中水和硫酸比例，利用硫酸与水发生水合作用释放的热能，使反应系统自行升温而达到显色效果免去外加热步骤。

蒽酮法具有很高灵敏度，适用于糖的微量测定，且试剂简单，操作简便，因而得到普遍应用。

三、材料、仪器设备及试剂
1.材料：烘干材料粉末（过筛100目）或剪碎混匀鲜样品。

2.仪器设备: 分光光度计；电子分析天平；水浴锅；100ml容量瓶；试管；漏斗；剪刀；移液管；洗耳球等。

3.试剂及配制：
蒽酮试剂：称取蒽酮200mg溶于100ml浓硫酸中。

该试剂不能久贮，宜用前配制。

100μg·ml－1
蔗糖标准母液：准确称取蔗糖100mg于烧杯加少量水溶解后，洗入
100ml容量瓶中定容至刻度。

四、实验步骤
1.蔗糖标准曲线制作
1.1取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～100μg蔗糖标准液
加入表中试剂后，向各管沿管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml，并立即摇动使混合均匀，置试管架上室温下显色，冷却后倒入比色杯，以0号管作空白对照，在620nm波长处，以多点校准总量法，制作标准曲线。

2.样品提取
称取干样品粉末100mg或剪碎混匀的鲜样品1g,放入试管中，加入蒸馏水10ml，置于沸水浴中提取20min，冷却后过滤入100ml容量瓶中，以热水冲洗残渣2～3次，一并滤入容量瓶中，待冷至室温，定容至刻度，即为样品待测液。

3.糖含量测定
吸取待测液0.2ml（含糖量30～80μg）,加入试管中，再加蒸馏水2.3ml，摇匀。

随后沿试管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml,立刻摇动混合均匀，置于试管架上显色，冷却至室温后，以空白管作对照，在620nm波长处，按多点校准定量法测定待测管中提取液糖含量。

五、结果计算。