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植物组织培养的基本步骤

植物组织培养的基本步骤
成熟细胞离体——(脱分化)——分生细胞——(分裂)——愈伤组织——(再分化)——形态建成————完整植株。

培养基的主要成分
【水分】
【无机盐】1.大量元素:N,P,K,Ca,Mg,S(由相关的无机盐提供) 2.微量元素:Fe,B,Cu,Mn,Mn,Zn,Co
【有机营养成分】1.糖类 2.维生素 3.氨基酸 4.肌醇 5.天然有机物【植物生长调节剂】1.生长素 2.细胞分裂素 3.其他生长调节剂
【凝固剂】琼脂
【其他物质】1.活性炭 2.抗生素 3.抗氧化物质 4.硝酸银
培养基和组织培养用具的灭菌方式
【培养基,无菌水】高压蒸汽灭菌,0.105MPa灭菌15~30分钟
【移栽基质】曝晒,甲醛熏蒸或高压蒸汽灭菌0.14MMPa灭菌1~2h 【接种室,缓冲室】紫外线灯照射30min,或气雾消毒剂
【超净工作台】紫外线灯30min,之后打开风机过滤除菌
【外植体】不同的化学消毒剂浸泡消毒
【接种工具】70%乙醇浸泡或擦拭,之后用火焰灼烧灭菌
【培养室】3%来苏尔喷雾,或甲醛,气雾消毒熏蒸
【皮肤】先用肥皂洗手,接种前用70%乙醇擦拭
【瓶口,管口】70%乙醇擦拭,用火焰封口
【培养瓶表面】70%乙醇擦拭
【台面,桌面】70%乙醇擦拭或喷雾消毒
植物外植体的灭菌方式
【茎尖,茎段,叶片】1. 用70%乙醇浸泡30秒,再用无菌水冲洗1次。

2.用2%次氯酸钠浸泡15min或0.1%升汞浸泡5~10min。

3.若材料有绒毛,最好在消毒液中加入几滴吐温。

4.消毒时要不断震荡,使植物材料与消毒剂充分接触。

5.最后用无菌水冲洗3~5次。

【果实】1.用乙醇迅速漂洗一下,再用无菌水冲。

2.用2%次氯酸钠浸泡10min,用无菌水冲洗2~3次。

【种子】用10%次氯酸钠浸泡20~30min,或0.1%升汞消毒5~10min,然后再用无菌水冲洗3~5次。

【花蕾】1.用70%乙醇浸泡10~15秒,无菌水冲洗一次。

2.在漂白粉中浸泡10min,用无菌水冲洗2~3次。

【根及地下部器官】用0.1%升汞浸泡5~10min 或用次氯酸钠浸泡10~15min,再用无菌水冲洗3~5次。

【消毒后的外植体应及时按照无菌操作技术接种在适宜的培养基上】。

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