洗脱。 • 色谱柱的装填分为干法和湿法两种。柱高和柱直径之比为7.5:1
分离效果最好。
荧光黄结构
亚甲基蓝结构
醚＜乙酸乙酯＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水＜乙酸
注意事项
• 2. 洗脱剂的选择：对未知样品先用极性小的溶剂洗脱，再用极性 大的溶剂洗脱；
• 3. 装柱的技术：松紧度； • 4. 吸附剂的用量； • 5. 柱高：柱子太高洗脱慢。
问题及讨论
• 洗脱剂极性的选择原则： • 1. 先极性小的，再极性大的，可以是单一溶剂，也可是混合溶剂； • 2. 溶剂纯度要高，并经干燥过的。溶剂的结构与吸附能力的关系： • 化合物的吸附性与它们的极性成正比，即极性大吸附力强，后
实验步骤
• 5. 清理：分离结束后，应先让溶 剂尽量流干，然后倒置，用吸耳 球从活塞口向管内挤压空气，将 吸附剂从柱顶挤压出。使用过的 吸附剂倒入垃圾桶里，切勿倒入 水槽，以免堵塞水槽。
注意事项
• 1. 吸附剂的选择和活化； • 常用洗脱剂的极性： • 石油醚＜环己烷＜四氯化碳＜甲苯＜苯＜二氯甲烷＜氯仿＜乙
柱色谱法
柱色谱-荧光黄和亚甲基蓝的分离
实验目的
• 1. 掌握色谱法的基本原理； • 2. 学会利用柱色谱分离提纯有机化合物的规范操作
实验原理
➢柱色谱利用吸附剂（硅胶、氧化铝等）对不同组分吸附 能力的差异从而达到分离目的。
➢常用的有吸附色谱和分配柱色谱两类 ➢吸附色谱常用氧化铝和硅胶做固定相 ➢分配柱色谱以硅胶、硅藻土和纤维素做支持剂，以吸收
实验步骤
• 1. 装柱（干法）：在色谱 柱收缩处塞一小团脱脂棉 后向柱内添加厚1cm左右的 石 英 砂 ， 然 后 添 加 100-200 目 的 氧 化 铝 约 18cm 左 右 ， 再在上面加一层1c附剂：向 柱中倒入一定量的 95%乙醇，打开活塞， 赶走气泡，注意控 制流出速度1滴/s左 右；用一大三角烧 瓶接取流出的乙醇；
实验步骤
• 3. 加样：当溶剂刚好流至上层石英 砂面时，立即用滴管沿壁加入1mL荧 光黄与亚甲基蓝的混合液，当溶液 流至石英砂面时，立即用少量的95% 乙醇清洗下管壁的有色物质，如此 连续2-3次，直至洗净为止；
实验步骤
• 4. 洗脱：用95%乙醇作洗脱剂 进行洗脱，当色谱柱内出现 明显谱带即可；
2．溶剂
色层的展开首先使用极性较小的 溶剂，使最容易脱附的组分分离， 然后加入不同比例的极性溶剂配 成的洗脱剂，将极性较大的化合 物洗脱下来。
实验用试剂
• 20cm×1cm层析柱； • 吸附剂：中性氧化铝100-200目；石英砂； • 荧光黄和亚甲基蓝的混合液；95％乙醇；
实验装置
当加入的洗脱剂流下 时，由于不同化合物 吸附能力不同，因而 以不同的速度沿柱向 下流动，继续洗脱时 ，吸附能力弱的组分 随溶剂首先流出。在 连续洗脱过程中，不 同组分或不同色带就 能分别收集，从而达 到分离纯化的目的
较大量的液体做固定相，而支持剂本身不起分离作用。
1．吸附剂
➢常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙等 ➢吸附剂应经过纯化和活化处理，颗粒大小均匀 ➢吸附剂粒子越小、表面积越大，吸附能力就越高，
但颗粒太小，溶剂的流速就太慢，应根据需要确定。
大多数吸附剂都能强烈地吸水，而且水分易 被其它化合物置换，而使吸附剂的活性降低， 通常用加热的方法使吸附剂活化。