实验一邻二氮菲分光光度法测定微量铁
实验目的和要求
1．掌握紫外可见分光光度计的基本操作；
2．掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的原理和方法；
3．掌握吸收曲线绘制及最大吸收波长选择；
4．掌握标准曲线绘制及应用。

实验原理
邻二氮菲（1,10—邻二氮杂菲）是一种有机配位剂，可与Fe2+形成红色配位离子：
Fe2++3
N
N
N
N
3
Fe
2+
在pH=3～9范围内，该反应能够迅速完成，生成的红色配位离子在510nm波长附近有一吸收峰，摩尔吸收系数为1.1×10-4，反应十分灵敏，Fe2+ 浓度与吸光度符合光吸收定律，适合于微量铁的测定。

实验中，老师我们又见面了采用pH=4.5～5的缓冲溶液保持标准系列溶液及样品溶液的酸度；采用盐酸羟胺还原标准储备液及样品溶液中的Fe3+并防止测定过程中Fe2+被空气氧化。

实验仪器与试剂
1．752S型分光光度计
2．标准铁储备溶液（1.00×10-3mol/L）
3．邻二氮菲溶液（0.15%，新鲜配制）
4．盐酸羟胺溶液（10%，新鲜配制）
5．NaAC缓冲溶液
6．50ml容量瓶7个
7．1cm玻璃比色皿2个
8．铁样品溶液
实验步骤
1．标准系列溶液及样品溶液配制，按照下表配制铁标准系列溶液及样品溶液。

2．吸收曲线绘制用1cm比色皿，以1号溶液作为参比溶液，测定4号溶液在各个波长处的吸光度，绘制吸收曲线，并找出最大吸收波长。

3．标准曲线制作
在选定最大吸收波长处，用1cm 比色皿，以1号溶液作为参比溶液，分别测定2至7号溶液的吸光度，平行测定3次，计算吸光度平均值，绘制标准曲线。

实验数据处理
1、 样品中铁的计算
2.50
50.00
C C X ⨯
=读取值 Cx=4.65×10-5
×50.00/2.50=9.30×10-4
mol/L
2、 摩尔吸光系数计算
在标准曲线的直线部分选择量两点，读取对应的坐标值，计算邻二氮菲配位物在最大吸收波长出的摩尔吸光系数：
1
21
2c -c A A ε-=
ε=(0.460-0.233)/(0.00006-0.00004)=2.00×10-5
7 样品溶液
4.65×10-5 mol/ml
实验注意事项
1、测定系列标准溶液和样品溶液时，必须使用同一只比色皿。

2、比色皿放入分光光度计样品室前，必须使用吸水纸将外表面擦拭干净。

3、比色皿在换装不同浓度溶液时，必须使用待测溶液润洗至少三次。

4、在比色皿未放入分光光度计测定光路时，必须将样品室舱打开。

讨论及思考
1．如果绘制你的标准曲线线性不好或者标准曲线有部分发生偏离，请分析原因。

答：标准曲线部分偏离的原因可能是：
（1）我感觉的数据如果有问题主要是感觉分光光度计不够精确，使用旋钮每次旋出相同的测定数值可能都不一样，有时小范围内甚至可能发生往大旋，波长数值反而变小的情况；
（2）也可能是装溶液时没有进行润洗，影响溶液的浓度。

2．计算的红色配位物摩尔吸光系数与文献是否一致？影响因素有哪些？
答：一致。

3．如果各个测定溶液的酸度值不同，会给实验结果带来怎么样的影响？
答：。