天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(单试剂速率法)
简介：
Leagene 天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测试剂盒(单试剂速率法)其检测原理是天门冬氨酸氨基转移酶(AST)催化天门冬氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应，草酰乙酸与NADH 经LDH 催化生成NAD +，上述方法实际为AST 速率法，其反应公式如下：在上述偶联反应中，NADPH 的氧化速率与样本中酶活性呈正比。

对于单试剂比色法，血清与试剂完整成分的底物溶液混匀，ALT 催化反应立即启动，进而计算酶的活性单位。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 准备样品：
① 血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，
-20℃保存1个月有效，用于AST/GOT 的检测。

② 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保存1个
月有效，用于AST/GOT 的检测。

③ (选做)样品准备完毕后可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续
计算单位蛋白重量组织或细胞内的AST/GOT 含量。

2、 分光光度计检测：按照下表设置对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避
免产生气泡。

如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

编号 名称
TE0135 100T
TE0135 200T
Storage
ALT 检测液(R)
成分 终浓度 2×50ml 2×100ml 4℃ 避光
Tris 缓冲液 100mM L-天门冬氨酸 240mM 酮戊二酸 12mM NADH 0.22mM LDH 2500U/L 防腐剂 15mM
使用说明书
1份
加入物
空白管 测定管 AST 检测液(R)(μl)
900
900
混匀孵育。

蒸馏水(μl) 45 －
待测样品(μl) －45
混匀，孵育，在340nm处各管吸光度变化，计算各管Δ
A/min。

3、生化分析仪检测：按照下表设置主要参数。

如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用
量或适当稀释后再进行测定。

波长340nm
反应温度37℃
孵育时间90s
比色杯光径 1.0cm
系数3376
待测样品15μl
ALT检测液(R) 300μl
计算：
分光光度计计算公式：AST(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(945/45)=ΔA/min×3376 生化分析仪计算公式：AST(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(315/15)=ΔA/min×3376
参考范围：成年健康人血清AST：8-40U/L
注意事项：
1、抗坏血酸≤30mg/dl，游离胆红素≤40mg/dl，结合胆红素≤40mg/dl，甘油三酯
≤2000mg/dl对测定结果无影响。

2、如果生化分析仪内无所要求波长的滤光片，应选择接近的滤光片。

3、二硝基苯肼显色液溶解以后，如果仍然有结晶析出，应弃用。

4、严重黄疸、脂血或溶血的血清，可能会引起测定管吸光度增高。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。

打开包装以后，4℃保存一个月。