孔号
样品稀释倍 数 PBS
被检鸡样品
1234
5
6
7
2× 4× 8× 16× 32× 64× 64×
25 25 25 25 25 25
25
25 25 25 25 25 25
25
8
9
Hale Waihona Puke 256× 512×25
25
25
25
10
11
12
1024×
抗原对照 红细胞 对照
25
25
25
25
4HAU血凝素 25 25 25 25 25 25
25
25
25
25
25
振荡器上振荡10s混匀，室温放置20min
弃25
1%红细胞
25 25 25 25 25 25
25
25
25
25
25
25
振荡10s混匀，室温作用 15min
结果观察
----
-
-
+
++
+++
++ ++
++ ++
-
注：-表示不凝集；++表示部分凝集；++++表示完全凝集。
血凝抑制效价：能使红细胞凝集全部被抑制的样品最高稀释倍数。
如果配制的4HAU准确，则1:4稀释度为凝集终点；
如果高于1:4，则说明血凝素浓度过高（抗体效价 低于正常值），
如果低于1:4，则说明血凝素浓度过低（抗体效价 高于正常值）。
根据检验结果进行调整，使工作液为4HAU。
四单位验证
2
34
5
67
1、在血凝板上每1－12孔内各加入25ulPBS；
2、在第一排第1孔内各加入被检样品25ul，然后倍 比稀释至第10孔，最后弃25ul；
3、第1－11孔内加入4单位抗原25ul（第11孔为抗 原对照第12孔为红细胞对照）；
4、轻轻振荡均匀，后放于室温或2~8℃中静置 30min
5、每孔加入1％鸡红细胞悬液25ul；
6、轻轻振荡10s均匀，室温15min。 7 、结果判定
【`病毒血凝抑制试验的操作方法（单位：L） 】
实验步骤
1、血凝素凝集价的测定 96孔微量板法，用PBS将血凝素稀释成不同倍数，加入与抑制试
验中的样品量等量的PBS，再加入1%鸡红细胞悬液，微量振荡器 震荡混匀（15s），置室温15min或，判定结果为1:256。
2、血凝素工作液配制及验证 2.1 4HAU血凝素的配制 如果血凝素凝集价测定结果为1:256，4HAU=256/4=64（即1:64），取
注意事项
1、红细胞的制备
（1）采血：采血前把注射器的抗凝剂往外推一下， 防止血液凝固阻塞针头，采完血后立即颠倒注射 器混匀2~4（3）只2~6月龄的SPF鸡的血液与等量 的阿氏液混合。
（2）1%红细胞血液制备 a 清洗过程中减少红细胞的破碎（拔掉注射器针头、
轻轻的混匀、缓慢吹打）
b 最好清洗3次，次数太多了红细胞变的脆弱。 c 2~8℃5d内用完。
血凝抑制效价：能完全抑制血球凝集的最高血 清稀释度即为该血清的血凝抑制效价。
实验材料
4个血凝单位血凝素
1%鸡红细胞
待测样品
PBS
NDV
AIV
IBV
浓度
0.1
（mol\L）
0.01
0.01
96孔U型微PH量反应板
微量移液器(20~100ul)、灭菌塑料吸头、微量 振荡器、西林瓶、吸管
2、血凝试验
（1）稀释抗原时控制好稀释的力度避免产生 气泡，每孔吹打混匀10次。
（2）红细胞用之前轻轻的颠倒混匀，避免产 生气泡。
（3）加红细胞时，枪头要悬空，不要碰触到 液面，避免交叉污染。
（4）设立标准抗原对照。
3、血凝抑制试验
（1）四单位血凝素配制
a 四单位血凝素配制过程中，尽量少更换移液工具， 多次更换移液工具或者多次吸取会增加误差；
100μL血凝素加PBS 6300μL，即成。 2.2 验证（检查4HAU血凝素是否准确） 应将配制的1:64的稀释液，分别以100μL的量加入PBS100μL、
200μL、300μL、400μL、500μL、600μL中混匀，然后从每一稀释度 中取25μL，加入25μLPBS中，再加入1%鸡红细胞悬液25μL，振荡10s 混匀。将血凝板置室温15min，倾斜45°判定结果（读结果的时间）。
红细胞凝集抑制试验
HI
实验原理 实验准备 操作过程 结果判定 注意事项
实验原理
当病毒悬液中加入特异性抗体时，这种红细胞凝 集的现象就被抑制，称红细胞凝集抑制试验，也叫
血凝抑制试验。
抗原
抗体
I am late！
HI试验的原理图
用途: 1·用已知病毒来检测被检血清中的相应抗体 2 ·也可以用已知血清来鉴定未知病毒。
b 四单位需验证准确，如果不准确重新配置或者进 行调整；
c操作前计算好所需四单位的量，避免浪费或者不足。
d 配制好的四单位血凝素室温4h内用完，现用现配， 不可反复冻融。
（2）添加四单位和红细胞时，枪头要悬空，不要碰 触到液面，避免交叉污染。
（3）设抗体的阳性对照组。
谢谢！