实验一 食品中游离氨基酸含量的测定
实验原理:
电位滴定法测定酱油中氨基酸态氮的含量。
氨基酸有氨基及羧基两性基团,它们相互作用形成中性内盐,利用氨基酸的两性作用,加入甲醛以固定氨基的碱性,使羧基显示出来酸性,用氢氧化钠标准溶液滴定后定量,根据酸度计指示pH 值,控制终点。
实验试剂:
1、甲醛(36%):应不含有聚合物。
2、氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L] 实验仪器:
1、酸度计;
2、20mL 移液管;
3、10mL 微量滴定管;
4、100mL 容量瓶;
5、250mL 烧杯;
6、磁力搅拌器; 实验步骤:
1、吸取5mL 试样,置于100mL 容量瓶中,加水至刻度,混匀,备用。
2、吸取上述稀释液20.00mL V 3置于200mL 烧杯中,加水60mL 水,插入电极,开动磁力搅拌器,用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH)=0.050mol/L]滴定至酸度计指示pH8.2,记录消耗氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]的毫升数,(可计算总酸含量)。
(使中性内盐分离成为氨基酸)
3、向上述溶液中准确加入10.0mL 甲醛溶液,混匀。
再用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]继续滴定至pH9.2,记录加入甲醛后滴定所消耗氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]的毫升数V 1。
重复做3组平行样。
4、取80mL 水,先用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至酸度计指示pH8.2,再加入10.0mL 甲醛溶液,混匀,再用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至pH9.2,记录加入甲醛后滴定所消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数V 2。
重复做3组平行样。
数据记录与计算
(一)数据记录:见下表
项目
样品 空白 加入甲醛后滴定所消耗 氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数
标准氢氧化钠溶液浓度(mol/L )
(二)结果计算
试样中氨基酸态氮的含量为:
()100100
5014
.03
21⨯⨯⨯⨯-=
V C V V X
式中:X —试样中氨基酸态氮的含量,g/100 mL ;
V 1—测定用试样稀释液加入甲醛后消耗标准碱液的体积,mL ; V 2—测定空白试验加入甲醛后消耗标准碱液的体积,mL ; C —氢氧化钠标准溶液的浓度,mol/L ; V 3—试样稀释液取用量,mL ;
0.014—与1.00 mL氢氧化钠标准滴定溶液相当的氮的质量。