临床基因扩增检验质量保证
正态分布 的基本统 计学含义 可用均数 （X）、标 准差（s） 和概率来 说明。
临床基因扩增检验质量保证
临床基因扩增检验实验室 常规测定步骤
• 标本收集：选择测定项目、标本收集和保存。 • 实验室测定：标本接收、贴标签、样本处理、核酸
扩增、产物检测、测定的有效性和临床诊疗价值。 • 报告和解释：结果发出、结果解释和临床管理。
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临床基因扩增检验的室内质量控制
•测定前的质量控制 •核酸样本的制备及其质量控制 •统计学质量控制 •质量控制的评价
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测定前质量控制
•实验室设施、仪器设备及管理 •理想的试剂和操作方法 •人员培训
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实验室设施、仪器设备及管理
• 临床基因扩增检验实验室应有充分合理 的空间、良好的照明和空调设备 ； • 实验室仪器设备应保养良好，实验用品 要达到相应的要求。加样器的校准？带 滤塞吸头的使用及质检？离心机？热循 环仪？水浴箱和/或恒温干浴仪？酶标仪 和洗板机？
决定在实时的测定结果的可接受性。当EQA用来为执业许 可或实验室认证的目的而评价实验室操作时，常描述为实 验室能力验证（Proficiency testing, PT）。在以前的文献中， EQA常描述室间质量控制。
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批 (Run)
• 在相同条件下所获得的一组测定。
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采样质量的评价
• 血清(浆)标本:溶血、脂血等；
• 分泌物、痰：评价内容包括细胞组成，所需类型细胞 的数量和核酸总量。 评价方法：包括肉眼观察,显微镜下观察和化学分析 等。
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采样及运输容器
• 标本的采集材料如棉签应为一次性使 用； • 采样及运输容器应为密闭的一次性无 菌装置； • 采样所用的防腐剂、抗凝剂及相关试 剂材料不应对核酸扩增及检测过程造 成干扰。
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室间质量评价（External Quality Assessment, EQA）
• 为客观比较一实验室的测定结果与靶值的差异，由外单位 机构，采取一定的办法，连续、客观地评价实验室的结果， 发现误差并校正结果，使各实验室之间的结果具有可比性。 这是对实验室操作和实验方法的回顾性评价，而不是用来
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质量保证、室内质控和室间质评之间的关系
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临床标本收集、运送、保存 及其质量控制
• 标本收集 • 标本保存 • 标本运送
临床基因扩增ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ验质量保证
标本收集
• 标本采集时间对扩增检测结果的影响 • 标本采集部位的准备 • 标本的类型和采集量 • 采样质量的评价 • 采样及运输容器 • 标本采集中的防污染
• 由实验室工作人员，采取一定的方法和步骤，连 续评价本实验室工作的可靠性程度，旨在监测和 控制本实验室工作的精密度，提高本室常规工作 中批内、批间样本检验的一致性，以确定测定结 果是否可靠、可否发出报告的一项工作。
• 可概括为:(1)执行者：实验室技术人员；(2)目的： 监测实验室测定的重复性；(3)功能：决定了当批 测定的有效性，报告可否发出。是对实验室测定 的即时性评价。
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标本保存
• 临床体液标本长期保存应在-70℃下。 • 如为提取核酸后用于DNA扩增分析的样
本，可于10 mmol/L Tris,1mmol/L EDTA(pH7.5～8.0)缓冲液中4 ℃下保存。 • 用于RNA扩增分析的样本，则应于上述 缓冲液中-80℃或液氮下保存。 • 核酸的乙醇沉淀物则可于-20℃下保存。
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标本运送
• 样本一经采集，则应尽可能快的送至检测实验室。 • 样本中如加入了适当的稳定剂,如用于RNA测定加入
GITC的血清(浆)样本和用于DNA测定的EDTA抗凝血 等,则可在室温下运送或邮寄。 • 实验室应根据待测靶核酸的特性，对各种临床样本的 运送条件作出相应的规定。
临床基因扩增检验的 质量保证
卫生部临床检验中心 李金明
临床基因扩增检验质量保证
质量保证 (Quality Assurance,QA)
•为一产品或服务满足特定质量
要求提供充分可信性所必要的 有计划的和系统的措施。
临床基因扩增检验质量保证
室内质量控制（Internal Quality Control,IQC)的概念
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标本采集时间对扩增检测结果 的影响
• 在疾病发展过程中，标本采集过早或过晚 都可能会给出假阴性结果。
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标本采集部位的准备
• 血液标本采集 • 分泌物标本:采集部位的清洁消毒 可去掉污染的微生物或其它杂物, 但应适度,过度清洁消毒有可能会 去掉或破坏靶微生物,故标本采集 部位的准备应由训练有素的人员进 行。
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标本采集中的防污染
• 采集中要特别注意污染，防止混入 操作者的头发、表皮细胞、痰液等； • 如使用玻璃器皿，必须经高压灭菌， 以使可能存在的RNase失活。
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标本保存
•靶核酸(尤其是RNA)易受核酸酶的作用而 迅速降解，因此标本的保存对于核酸扩增 测定的有效性极为重要。 •使用GITC作为稳定剂保存标本，标本可 在室温下稳定约7天。
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理想的核酸扩增实验室设计A
产物分析区
定义
• 正态分布(Gaussian distribution) 当一质控物用同一 方法在不同的时间重复多次测定，当测定数据足够多 时，如以横轴表示测定值，纵轴表示在大量测定中相 应测定值的个数，则可得到一个两头低，中间高，中 为所有测定值的均值，左右对称的“钟形”曲线，亦 即正态分布，又称高斯分布。
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标本的类型和采集量
• 标本的类型: 血清(浆)、分泌物、痰、粪便、尿和 脑脊液等。 • 标本的采集量:应根据所测病原体而定。一般来说， 如果标本的量对病原体培养够用的话，则其量亦足 以用于核酸提取及其后的扩增检测。 • 对于定量测定来说，对标本的收集要求更为精确。
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