25
1.6 扩增区 (a) 核酸扩增仪;
(b)微量加样器；
(c)可移动紫外灯；
(d)专用工作服和工作鞋；
(e)消耗品（带滤心吸头、 一次性手套等）； (f)专用实验记录本、记 号笔等。
扩增区
功能：cDNA合成、DNA扩增及检测。 扩增区的主要仪器就是核酸扩增热循环
仪，该仪器需进行校准。
27
产物分析区
序号
验收内容
1
实验室设置和设备
验收意见
符 基但 不 缺 暂
合 本有 符 此 不
符缺 合 项 需
合陷
考
核
评论与说明
1.1 实验室的规范化分区:原则上 应分为四个区,但如使用全自 动扩增检测仪,区域可适当合 并
1.2 各工作区的明确标记
1.3 实验室应配备开展临床基因 扩增检测所需的所有仪器设 备（包括质控物）。保证 《临床基因扩增检验实验室 管理办法》和《临床基因扩 增检验实验室工作导则》的 有关要求得到满足。
34
检测技术人员要求---人员应有培培训训和能及力能评估力的记评录 估
培训：符合资质的人员还要接受实验室生物安全以及厂家 的上岗前仪器设备操作、维护及校准等的培训。技术培训 内容应覆盖工作人员所涉及的所有工作范畴，培训的评估 结果是确定人员是否适合其岗位的依据。
能力评估：实验室应建立操作人员能力评估机制。每年至 少实施一次人员的能力评估，以评估其临床基因扩增检测 工作的胜任程度。参照评估结果制定人员持续培训计划。 操作人员的操作误差分析、检测过程变更可作为培训需求
根据使用仪器的功能，区域可适当合并。例如使用 实时荧光PCR仪，扩增区、扩增产物分析区可合并；采 用样本处理、核酸提取及扩增检测为一体的自动化分析 仪，则标本制备区、扩增区、扩增产物分析区可合并。
8
PCR实验室的空气流向
临床基因扩增检验实验室的空气流向可按照试剂 储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析 区进行，防止扩增产物顺空气气流进入扩增前的区域。 可按照从试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→ 扩增产物分析区方向空气压力递减的方式进行。可通 过安装排风扇、负压排风装置或其他可行的方式实现。
走廊
走廊
其他实验室
空气流向
标本制备区
其他实验室
其他实验室
其他实验室
本图来自李金明教授 18
标本制备区
空气流向+
空气流向
试剂准备区
门
门
扩增及产
物分析区
空气流向++
门
门
本图来自李金明教授
A
扩增区
门 产物分析区
标本制备区 门
门 试剂准备区
门
外走廊
门
B
本图来自李金明教授
扩增及产物 分析区
标本制备区 门
试剂准备区 门
24
标本制备区
标本制备区内的仪器设备主要有生物安全柜 、加样器、 高速台式冷冻离心机、水浴箱和/或加热模块、混匀器、 冰箱、可移动紫外灯、专用工作服和鞋、消耗品（带滤 芯吸头、一次性手套等）、专用记录本和记录笔。加样 器应定期校准。如需处理大分子DNA，应当具有超声波 水浴仪。
加热模块和水浴应使用已经校准的温度计定期对所设置 的温度进行校准。
纳入培训活动，需记录人员的能力评估过程。
35
4． 设备管理和质控物
4.1 所有设备应有维护程序文件；
*
如果任一设备有问题应立即停
止使用，并加上明显标识，如
可能应将其贮存在规定的地方
直至修复；
*
修复的设备必须经校准、检定
（验证）或检测满足要求后方
能再次投入使用；
*
实验室应检查由于上述缺陷对
以前所进行的检测工作的影响。
28
核酸扩增后产物的分析方法多种多样，如膜上或微孔板 或芯片上探针杂交方法（放射性核素标记或非放射性核素标 记）、直接或酶切后琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、 Southern转移、核酸测序方法、质谱分析等。本区是最主 要的扩增产物污染来源，因此必须注意避免通过本区的物品 及工作服将扩增产物带出。在使用PCR-ELISA方法检测扩 增产物时，必须使用洗板机洗板，废液必须收集至1 mol/L HCl中，并且不能在实验室内倾倒，而应当至远离PCR实验 室的地方弃掉。用过的吸头也必须放至1 mol/L HCl中浸泡 后再放到垃圾袋中按程序处理，如焚烧。
试剂储存和准备区
功能：贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混 合液的准备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和 准备。
试剂准备区的仪器设备主要有冰箱、微量加样器、 混匀器、可移动紫外灯、专用工作服和鞋、消耗品 （带滤芯吸头、一次性手套等）、专用记录本和记 录笔。加样器应定期校准。
23
标本制备区
功能：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其 加入至扩增反应管。对于涉及临床样本的 操作，应符合生物安全二级实验室防护设 备、个人防护和操作规范的要求。
2.4 应有实验室“内务管理”（如 人员流动、清洁等）制度；
2.5 实验室应有关化学试剂管理、 废弃血清处理、生物防护等的 措施
通风问题较多： 排风压力设置不 合理
表面实验室清洁SOP要点
目的:为了使实验室台面、地面和仪器设备在使用后，处于洁净和无 感染性状态，以防止出现因仪器设备不洁影响检测或仪器使用寿命； 防止因实验室台面、地面和仪器设备的生物传染危险性造成实验室人 员感染，以及防止实验室交叉污染而出现假阳性结果等。
材料的具体内容作详细规定。
37
检测系统的确认、运行与维护
检测系统的确认 实验室必须实施检测系统的确认活
动。确认活动包括检测系统购置前的设计确认，使用前
的安装确认、运行确认和性能确认，检测系统使用后的
性能监控及再确认。除应提供厂商的安装确认报告之外
，实验室还应对每个检测系统进行分析灵敏度、重复性
扩增区
标本制备区 试剂准备区
空气流向
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
专用走廊
工作流向
本图来自李金明教授 16
标本制备区
空气流向 +
空气流向
试剂准备区
门
门
扩增及产
物分析区
空气流向++
门
门
本图来自李金明教授 17
扩增和产 物分析区
空气流向
其他实验室
试剂准备区
空气流向
其他实验室
其他实验室
规定应具有的SOP
仪器设备的维护保养程序、 仪器设备的校准程序、 仪器设备的操作程序、 临床标本的收集程序、 临床标本的处理（核酸纯 化）程序、 临床标本的保存程序、 核酸扩增及产物分析检测 的操作程序、
试剂的质检操作程序、 消耗品购置验收质检程序、 废弃物的处理程序、 内务管理程序、 室内质量控制程序、 抱怨处理程序。
适用范围应包括实验室地面、台面和仪器设备等的清洁。 按实验室台面、地面和仪器设备分开来写各自的具体清洁方法，要具
体而又有可操作性。 应规定工作人员在清洁时，必须按试剂准备区标本制备区扩增
(及产物分析)区方向进行，不得逆行 规定每一工作区域的清洁必须使用专用的清洁用具，不得混用 规定有潜在生物传染危险性材料溅出时的消毒清洁方法
9
PCR实验室工作基本原则
进入各工作区域应当严格按照单一方向进行 各工作区域必须有明确的标记，不同工作区域内的
设备、物品不得混用。 不同工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜色）。
工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出。 实验室的清洁应当按试剂贮存和准备区→标本制备区
→扩增区→扩增产物分析区的方向进行。不同的实验 区域应当有其各自的清洁用具以防止交叉污染。
临床基因扩增检验实验室 验收要求和要点
宁夏回族自治区人民医院
临床医学检验诊断中心 杜宗孝 2016.08
临床基因扩增检验实验室 申报及验收程序
二级以上医院
填写《临床基因扩增检验实验室设置申请书》
（省级医疗机构）
（地、市(县)级医疗机构）
省卫计委医政处
相应的卫生行政部门
省临床检验中心初步技术审核
合格者开始试运行（三个月），同时报省卫计委备案 验收合格后，授予验收合格证书（证书有效期五年）
门
外走廊
门
错 误 的 设 置
临床标本的接收
应在四个测定区域之外的地方或适合的地方。 接收的标本应收集在原始容器中，不能接收从
其它检测如生化、免疫检验等分出来的标本 在核酸提取时，由基因扩增检验实验室人员将
标本带入至标本制备区。
21
1.4 1.5
试剂贮存和准备区 a.冰箱； a.混匀器； a.微量加样器； a.可移动紫外灯； a.专用工作服和工作鞋； a.消耗品（带滤心吸头、一次性手 套等）； a.专用实验记录本、记号笔等。 标本制备区 (a) 冰箱 (2~8℃和-20℃或-80℃)； (a)高速台式冷冻离心机 (c) 水浴箱和/或加热模块 (d) 生物安全柜 (a)混匀器； (a)微量加样器； (a)可移动紫外灯； (a)专用工作服和工作鞋； (a)消耗品（带滤心吸头、一次性手套等）； (a)专用实验记录本、记号笔等。
临床基因扩增实验室设置的一般原则 各区独立
注意风向
“十六字口诀”
因地制宜
方便工作
本片来自李金明教授
理想的PCR实验室设置A
产物分析区
扩增区
标本制备区 试剂准备区
空气流向
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
专用走廊
工作流向
本图来自李金明教授
15
理想的PCR实验室设置B
产物分析区
10
PCR实验室工作基本原则
工作结束后，必须立即对工作区进行清洁。实验台表面 应可耐受次氯酸钠等化学物质的消毒清洁作用。实验台 表面的紫外照射应当方便有效。由于紫外照射的距离和 能量对去污染的效果非常关键，因此可使用可移动紫外 灯（254nm波长），在工作完成后调至实验台上60～ 90cm内照射。由于扩增产物仅几百或几十碱基对 （bp），对紫外线损伤不敏感，因此紫外照射扩增片段 必须延长照射时间，最好是照射过夜。