7 镜检及微核识别 找到分生组织区细胞分散均匀、膨大、分裂相对多的部位， 再转到高倍镜（物镜40X）下进行观察 微核的识别标准 （1）凡是主核大小的1/3以下，并与主核分离的小核。 （2）小核着色与主核相当或稍浅。 （3）小核形态可以是圆形、椭圆形、不规则形。 每一处理观察5个根尖，每个根尖观察1000个细胞，并计数 其中有微核的细胞数（微核千分率）
蚕豆根尖微核测试技术
实验原理
蚕豆根尖细胞在分裂时染色体的复制过程中常 发生断裂，断裂下来的片段在正常情况下能自行 复位愈合，如果此时受到外界诱变因子的作用， 会阻碍染色体的愈合，于是会出现微核，由于产 生的微核数量与外界诱变因子的强弱成正比，所 以可用微核出现的百分率来评价环境诱变因子对 生物遗传物质影响的程度。
4 “污染指数”判别：此方法可避免因实验条件等因 素带来的微核千分率本底的波动，故较宜适用。 污染指数=样品实测微核千分率平均值/对照组微 核千分率平均值 0-1.5 基本没有污染 1.5-2.0 轻污染 2-3.5中污染 3.5以上重污染
பைடு நூலகம்
结果分析与报告
1 各测试样品微核千分率的计算 2 如果被检测样品不多，可直接用各样品微核千分率平 均值与对照组比较（t检验），从差异的显著性判断 水质污染与否。 3 如果监测的样品较多，可先用方差分析（F检验）看 各采样点所测的微核千分率平均值和对照的差异显 著性。如差异显著，还可进行各采样点微核差异显 著性的多重比较，看被检样品微核千分率平均值差 异显著性的分组情况，以归纳划分这些不同采样点 不同级别的污染程度。
3 根尖细胞恢复培养 处理后的种子用自来水（或蒸馏水）浸洗三次，每次2～3分 钟。洗净后再置入辅有湿脱脂棉中，25℃下再恢复培养 22～24h。 4 固定 将恢复后的种子，从根尖顶端切下1cm长的幼根，用卡诺 氏固定液固定24小时。固定后的根如不及时制片，可换入 70%的乙醇溶液中置4℃冰箱中保存备用。 5 解离：用蒸馏水浸洗固定好的幼根两次，每次5分钟，吸 净蒸馏水，加入5mol/L盐酸将幼根浸没，室温下酸解10分 钟，幼根软化即可。 6染色 吸去盐酸，用蒸馏水浸洗幼根三次，每次1～2分钟。截下 1～2mm左右长的根尖，滴加席夫氏试剂（在生物实验可 以和经过酸化的DNA 发生反应，DNA 被染成紫红色，而 不和核仁，细胞质发生反应，因此可以来鉴定DNA的存 在。），染色5～8分钟，加盖玻片，压片观察
操作步骤
1 浸种催芽 将实验用蚕豆按需要量放入盛水烧杯中，在25℃下浸泡24 小时，此间至少换水两次，所换水应25℃预温。种子吸胀 后，用纱布松散包裹置瓷盘中，保持温度，在25℃温箱中 催芽12～24小时，待初生根长出2～3mm时，再取发芽良 好的种子，放入铺满滤纸的瓷盘中，25℃继续催芽，经约 36-48小时，大部分初生根长至1～2cm左右，根毛育良好， 此时可用来进行实验。 2 蚕豆根尖染毒 选取初生根生长良好，根长一致的6-8粒种子，放入盛有 被测液的培养皿中，被测液浸没根尖即可，一般染毒6-8h， 另设自来水对照组