去除小颗粒
装填缓冲液平衡
匀浆准备
装柱
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小颗粒的去除
装柱前务必进行小颗粒去除的操作!
• 小颗粒的存在会阻塞筛板或烧结板，并最终会导致整个柱子的压降增大
小颗粒的去除采取悬浮静置移注法 重复这一步骤不少于3次
借助显微镜可检 查小颗粒的存在
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– 这一操作可以将填料装得最为紧密，并且可以防止死体积的发生或胶体内沟槽 的出现。
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TOYOPEARL-典型的装填缓冲溶液
SEC HW-40, HW-50, HW-55, HW-65 and HW-75
IEC DEAE-650, QAE-550C, Super-Q-650, CM-650, SP-550C, MegaCap II SP-550EC and SP-650
0.1M Na2SO4, NaNO3, or NaCL in 50mM phosphate or Tris buffer. Organic solvents may be applied to HW-40 as adsorption chromatography like Sephadex LH-20.
内容提要 装填前的准备工作
– 小颗粒的去除 – 缓冲液平衡 – 匀浆准备
装填步骤 / 层析柱类型
层析柱的操作
பைடு நூலகம்– 柱子的平衡与柱效评价 – 保存
Peak Biotech
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TOYOPEARL树脂填料的装填
装填的一般原则
☆TOYOPEARL的装填压力最好在0.5 - 5 bar的范围内 ☆装填流速至少比实际操作流速高50% ☆不要使用会产生剪切力的装置（如：磁力搅拌器、 齿轮泵）
1 M NaCl in 50 mM phosphate, Tris, or acetate buffer
HIC Ether-650, Phenyl-650, PPG-600m, Butyl-650, SuperButyl550C and Hexyl-650c
2M Na2SO4 or (NH4)2SO4 in 50mM phosphate buffer
2M NaCl in 20 nM phosphate buffer 0.5M NaCl or 0.2M glycine in 20mM phosphate or Tris buffer 2M KCI or NaCl in 20mM phosphate
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匀浆准备
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TOYOPEARL树脂填料 大小型工业制备色谱柱的装填实践
A. Sprauer – 5/06
Götec
GE Healthcare
Pall
Pall-Euroflow / Resolute
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TOYOPEARL树脂填料的装填
显微镜微观显示 – Toyopearl 650 M
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装填缓冲液的平衡
在去除小颗粒时的最后一次步骤中可加入装填缓冲液进行填料的 平衡
最好根据实际生产中所使用的缓冲液选取合适的装填缓冲溶液
一般来讲，分离纯化工艺中将使用到的最高离子强度的流动相是 装填缓冲液的首选
- 这些装置会磨碎树脂填料并产生小颗粒
☆ TOYOPEARL是一种刚性强的树脂填料，装填时务必 区别于一般的软式琼脂糖凝胶
Superformance / Götec
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TOYOPEARL树脂填料的装填
基本步骤
TOYOPEARL出货时为悬 浮液状态（含20%乙醇）
Ether-650, Phenyl-650 Butyl-650, DEAE-650 Super-Q-650, CM-650 SP-650 and all Affinity
QAE-550C and SP-550C
使用约1.1倍柱体积的静置胶 使用约1.2倍柱体积的静置胶 使用约1.25-1.4倍柱体积的静置胶
AFC AF-Tresyl and AF-Epoxy-650M
AF-Formyl-650M, AF-Amino-650M and AF-Carboxy-650M
AF-Heparin HC-560M
AF-Chelate-650M
AF-Blue HC-650M, AF-Red-650M
0.5M NaCl in 0.1M NaHCO3 or phosphate buffer 1M NaCl in 100mM phosphate or NaHCO3 buffer
Settling resin
Slurry preparation in a separate tank
Amicon Moduline-120cm ID
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对于给定的柱子，装柱所需的静置胶体积
Toyopearl HW-40, HW-50, HW-55 HW-65 and HW-75F
❖ 利用量筒测量静置胶体体积或使用水泵抽滤浆液至湿滤饼后 计算装填所需要的填料体积
❖ 通过添加装填缓冲液调节浆液浓度:
- 流动式装填柱 ~ 40 - 70% (v/v)
- 自动装填柱 20 - 60% (v/v)
❖ 最终装填好的柱床体积是要小于装填前胶体静置体积或抽干 的湿滤饼的体积
Slurry preparation in the column
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主要装填方法
o 恒流速装填法 o 恒压装填法 o 辅助的重力沉降装填法
装填方法
装填速度 流速范围 重复性
泵 压力计
不同装填方法的特点
恒流速
快 可增大至较高 很好
恒速 需要
TOYOPEARL的静置时间
TOYOPEARL 粒径
Coarse C级规格: 100 µm
Medium M级规格: 65 µm
Fine
F级规格: 45 µm
Superfine S级规格: 35 µm
水中静置时间
15-30 Min. 30-45 Min. 45-60 Min. 60-90 Min.
Amicon Moduline-120cm ID