吸附剂的选择
中性、酸性物质优先试用硅胶分离，如果 效果不好可以使用氧化铝 碱性物质也可以使用硅胶分离，但需要用 三乙胺等碱性物质碱化吸附剂 如果选择氧化铝分离，需要使用氧化铝TLC 板点板，使用硅胶板不能准确选择流动相 体系

吸附剂的选择
吸附剂目数的选择 对于Rf值>0.4的杂质，可以选择目数100~200的 硅胶 对于Rf值在0.2~0.4的，一般用200~300目 对于Rf值在0.1~0.2的，用300~400目 对于Rf值<0.1的，需要更多的吸附剂用量、较小 的流动相体系、较长的时间
乙酸乙酯：石油醚—丙酮：石油醚—二氯甲 烷:(乙酸乙酯)：石油醚—乙酸乙酯：正己烷（价 格贵不推荐） 甲醇：氯仿—甲醇：二氯甲烷—乙醇：二氯甲 烷
比如，有的物质在乙酸乙酯里溶解度很差， 上柱后样品不能有效的溶解在流动相中， 影响分离，可以改用丙酮、二氯甲烷、或 者三种溶剂同时混合使用 比如，使用甲醇：二氯甲烷体系极性较大 时，可以改换乙醇：二氯甲烷体系，就可 能得到较好的分离效果
塔板理论

理论塔板高度越低，在单位 长度色谱柱中就有越高的塔 板数，则分离效果就越好。 决定理论塔板高度的因素有： 固定相的材质、色谱柱的均 匀程度、流动相的理化性质 以及流动相的流速等。

塔板理论
塔板理论是基于热力学近似的理 论，在真实的色谱柱中并不存在 一片片相互隔离的塔板，也不能 完全满足塔板理论的前提假设。 塔板理论虽然能很好地解释色谱 峰的峰型、峰高，客观地评价色 谱柱地柱效，却不能很好地解释 与动力学过程相关的一些现象， 如色谱峰峰型的变形、理论塔板 数与流动相流速的关系等。
A B

基本操作程序
清洗砂芯， 检查柱子 装柱：干法， 湿法 上样：干法， 湿法
洗脱：根据TLC 情况配置洗脱液
收集：检测 方法选择
使用常压或减压蒸馏， 冻干等方法除去溶剂
装柱

干法
直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧， 至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度， 最后再用油泵直接抽，这样就会使得柱子装的很结实。 接着是用洗脱剂“走柱子”，一般洗脱剂是采用TLC 分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。通常上面 加压，下面再用油泵抽，这样可以加快速度。干法装柱较 方便，但最大的缺陷在于“走柱子”时，由于溶剂和硅胶 之间的吸附放热（可以用手摸柱子明显感觉到），容易产 生气泡，这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚，二氯甲 烷更为明显。

湿法： 先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填 入柱子中，然后再加压用淋洗剂 “走柱 子”，本法最大的优点是一般柱子装的比 较结实，没有气泡。
上样

干法： 把待分离的样品用少量溶剂溶解后， 在加入少量硅胶（一般是样品的1~2倍量）， 拌匀后再旋去溶剂。如此得到的粉末再小 心加到柱子的顶层。干法上样较麻烦，但 可以保证样品层很平整。 而且适用于溶解性差的样品，使用湿 法则需要较多的溶剂，导致上样层变厚
柱层析技术的讨论
1.基本原理及分类 2.常用吸附剂 3.流动相体系 4.层析柱的选择 5.基本操作和注意事项
基本原理

色谱法的分离原理就是利用待分离的各种物质在 两相中的分配系数、吸附能力等亲和能力的不同 来进行分离的。 由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与 固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随 着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次 的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不 同，从而按一定次序由固定相中先后流出。与适 当的检测方法结合，实现混合物中各组分的分离 与检测。
流动相体系的选择
特殊样品：会造成拖尾，严重影响分离效果 碱性物质

先用千分之一到百分之一的氨水、三乙胺或者氨甲醇， 碱化柱子
酸性物质
洗脱剂中加千分之一的醋酸，或苯磺酸
层析柱的选择

关于柱子的尺寸，应该是粗长 的最好 ：横截面/高度比 根据待分离的样品的量进行选 择：装柱太短了可能分离效果不
好，太长了也会由于扩散或拖尾导 致分离效果不好，同时浪费时间， 不稳定的物质还可能会变质。

流动相体系的选择
1.
首先从待分离物质的结构上判断
极性基团较多的，如胺基、羧基，选择极性 较大的体系。一般为甲醇：氯仿体系 可形成氢键部位较多的，应选择极性较大的 流动相体系 脂溶性集团较多的，一般乙酸乙酯：石油醚 体系就可以
2.
3.
流动相体系的选择

可替换的流动相体系 考虑到物质的溶解性和极性变化，上述 流动相体系还可以做一些变化：

吸附剂的选择
吸附剂的量的选择 一般为5~40倍 常用的为10~20倍 由流动相体系、吸附剂目数综合决定。

流动相体系

正己烷和石油醚<环己烷<四氯化碳<三氯乙烯<二 硫化碳<甲苯<苯<二氯甲烷<氯仿<乙醚<乙酸乙酯 <丙酮<丙醇<乙醇<甲醇<水<吡啶<乙酸 极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统（有时样品溶 解性差的可以加入二氯甲烷） 极性较大的用 甲醇：氯仿系统 极性大的用 甲醇：水：正丁醇：醋酸系统

塔板理论

基于热力学的塔板理论 它是色谱学的基础理论，塔板理 论将色谱柱看作一个分馏塔，待分离 组分在分馏塔的塔板间移动，在每一 个塔板内组分分子在固定相和流动相 之间形成平衡，随着流动相的流动， 组分分子不断从一个塔板移动到下一 个塔板，并不断形成新的平衡。一个 色谱柱的塔板数越多，则其分离效果 就越好。

流动相体系的选择

由TLC实验数据推断柱层析流动相配比：
在选择一定的流动相的前提下，调整流动相组分或比例，使目标 物的Rf值为0.5，与邻近杂质的分离度至少在0.1以上（当然是越大 越好，Rf达到0.2~0.3就很容易分离了）

根据所选的吸附剂的目数
因为TLC是高效板，硅胶柱的分离效果较差，所以一般需要在 TLC流动相的基础上放大5~10倍，甚至更多才可以得到相似的分离 度

分附剂，洗脱剂（流动相）； 分配色谱柱（萃取原理）：载体，固定相， 流动相； 离子交换树脂柱； 凝胶柱
吸附色谱柱较为常用，下面重点讨论
吸附剂
硅胶 中性、酸性，比较适合分离中性或酸性物质 粒度100~200目，200~300目，300~400目，更 高 氧化铝 酸性，适合分离酸性物质 中性，pH值7.5，适合分离碱性物质 碱性，pH值10，适合分离碱性物质 聚酰胺 硅藻土 活性炭