酶联免疫法与时间分辨荧光免疫法检测HBsAg陈桂花1a，谭玉华2，罗颖照1b（1.广州经济技术开发区红十字会医院，a检验科,b体检中心，广东广州 510530 ；2.广州市丰华生物工程有限公司，广东广州 510730）摘要：目的比较2种方法4种试剂乙型肝炎病毒（HBV）表面抗原（HBsAg）的检测性能，并探讨HBsAg阳性HBV血清标志物（HBV M）模式组间及其与HBsAg阴性模式组间的HBsAg 浓度差异。

方法酶联免疫法（ELISA）对1205例标本HBV M进行定性检测。

其中定性检测的153例标本再用3个厂家的时间分辨荧光免疫法（TrFIA）定量测试试剂进行HBsAg比对检测，其余经定性检测的1052例标本均再用TrFIA定量测试试剂进行HBsAg定量检测，对HBsAg结果进行统计分析。

结果 2种方法4种试剂间HBsAg阳性检出率差异均无统计学(P>0.05)，3个厂家的TrFIA法试剂HBsAg定量检测结果相关性良好，r>0.95。

TrFIA法能对0.2ng/ml—1.0ng/ml的低浓度HBsAg标本进行有效检测。

研究发现TrFIA法定量检测未经稀释的HBV感染者血标本HBsAg浓度在0.2ng/ml—650ng/ml间。

“HBsAg、e抗原（HBeAg）、核心抗体（抗-HBc）”阳性模式组HBsAg浓度与“HBsAg、抗-HBc”阳性、“HBsAg、e抗体（抗-HBe）、抗-HBc”阳性、“HBsAg”单阳性模式组HBsAg浓度差异有统计学意义（P<0.05），“HBsAg、抗-HBc”阳性模式组和“HBsAg、抗-HBe、抗-HBc”阳性模式组间HBsAg浓度差异无统计学意义(P>0.05)，“HBsAg、抗-HBc”阳性模式组、“HBsAg、抗-HBe、抗-HBc”阳性模式组HBsAg 浓度与“HBsAg”单阳性模式组HBsAg浓度差异有统计学意义（P<0.05），“HBsAg”单阳性模式组和“HBsAg阴性模式”组HBsAg浓度差异有统计学意义（P<0.05），“HBsAg阳性模式”组HBsAg浓度与“HBsAg阴性模式”组HBsAg浓度差异有统计学意义（P<0.05）。

结论 HBsAg 出现的早晚和它被清除的早晚与感染剂量、感染方式以及病情轻重有关。

HBeAg或抗-HBe 的出现与HBsAg的浓度呈一定的关系，HBsAg浓度与病毒的复制存在一定的关系。

ELISA法HBV M定性检测结合TrFIA法HBsAg定量检测对HBV感染诊断和防治具有重要意义。

关键词：酶联免疫法；时间分辨荧光免疫法；乙型肝炎病毒，表面抗原HBsAg是HBV感染后血清中首先出现的标志物HBV M，可作为乙肝的早期诊断和普查项目。

HBsAg的检测受到许多研究者的关注[1-6]，随着标记免疫方法学的飞跃发展，HBsAg检测的灵敏度有了进一步提高，并且定量结果取代了定性报告，为临床诊断提供了更多的信息。

作者采用了1个厂家的ELISA法定性诊断试剂与3个厂家的TrFIA定量测试试剂对HBsAg 进行了比对检测，结果与分析如下。

一材料与方法1. 标本标本采自广州市经济技术开发区红十字会医院门诊病人、住院病人和体检人员标本1205例，及时分离血清，-20℃保存备用。

2. 仪器与试剂 ST-360 型酶标仪（上海科华公司），酶联免疫法乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（国药准字S1*******，上海荣盛公司）；Victor2-D1420时间分辨荧光免疫仪（美国PE公司）；时间分辨荧光免疫法乙型肝炎病毒表面抗原定量测试试剂盒[国药准字S2*******，广州丰华公司；国药准字S2*******，苏州新波公司；国食药监械（准）字2007第3401095号，中山大学达安公司]；DEM-Ⅲ型自动酶标洗板机和FWZ-Ⅱ型恒温微量振荡仪（广州丰华公司）。

3. 方法 ELISA法与TrFIA法均严格按试剂盒和仪器说明书操作。

ELISA法对以上1205例标本进行定性检测，按说明书结果判断方法判读阴阳性，对弱阳性的HBV M、“HBsAg、抗-HBs”或“e抗原、e抗体”双阳模式的HBVM均须2孔复查，仍为阳性者判为阳性。

其中定性检测作者简介：陈桂花，女，1974年9月生，本科，检验技师，主要从事免疫学检验工作。

的153例标本再用以上3个厂家的TrFIA定量测试试剂进行HBsAg比对检测。

其余经定性检测的1052例标本均再用广州丰华公司TrFIA定量测试试剂进行HBsAg定量检测。

TrFIA法如HBsAg检测结果≥0.5ng/ml时判为阳性，<0.2 ng/ml时判为阴性；如0.2 ng/ml≤HBsAg<0.5ng/ml时均须以上3厂家TrFIA定量测试试剂盒各3孔复检，如有2孔仍为HBsAg ≥0.2 ng/ml时判为该试剂盒检测HBsAg阳性，如有2家TrFIA定量测试试剂盒检测HBsAg ≥0.2 ng/ml时判为该标本HBsAg阳性。

用TrFIA法HBsAg结果结合ELISA法相应标本其它HBVM结果，重新确定HBVM抗原抗体模式。

4. 统计与分析抗原抗体排列顺序：(1) HBsAg；(2)抗-HBs；(3) HBeAg；(4)抗-HBe；(5)抗-HBc。

以阳性项目的序号代表该阳性项，同一患者血清HBVM组合称抗原抗体模式（如“1+3+5”代表“HBsAg，HBeAg，抗-HBc”同时阳性；“1+4+5”代表“HBsAg，抗-HBe，抗-HBc”同时阳性）。

对以上4个厂家试剂检测的153例标本HBsAg结果进行比较分析，计算各试剂间检测HBsAg的粗一致性、约登指数、真阳性符合率、真阴性符合率，并采用配对资料Χ2检验，再对 3个厂家的TrFIA法HBsAg定量检测结果进行回归分析。

对广州丰华公司TrFIA定量试剂检测的1205例标本HBsAg结果，按“1+3+5”、“1+4+5”、“1+5”、“1”等抗原抗体模式和“HBsAg阴性”模式进行统计，计算平均值（X）和标准偏差（SD），对组间HBsAg 浓度差异采用秩和检验。

二结果1. 2种方法4种试剂比对试验 153例标本HBsAg检测结果，3个厂家的TrFIA法试剂与ELISA法试剂HBsAg检测结果比较，3个厂家的TrFIA法试剂间HBsAg检测结果相互比较，2种方法4种试剂间HBsAg阳性检出率差异均无统计学意义(P>0.05)，3个厂家的TrFIA法试剂HBsAg定量检测结果相关性良好，r>0.95，结果详见表1。

表1 2种方法4种试剂检测153例标本HBsAg结果比较试剂配对粗一致性（%）约登指数真阳性率（%）真阴性率（%）χ2检验 (P) 回归方程α=0.05, χ2（0.05)(1)=3.48丰华TrFIA与荣盛ELISA 97.38 0.9478 98.67 96.15 0.25 (＞0.05)新波TrFIA与荣盛ELISA 96.73 0.9354 98.67 94.87 0.80 (＞0.05)达安TrFIA与荣盛ELISA 95.42 0.9113 98.67 92.31 2.28 (＞0.05)新波TrFIA与丰华ELISA 99.35 0.9872 100.0 98.68 0 (＞0.05) Y=0.9665X+4.7739，r=0.9569 达安TrFIA与丰华ELISA 95.42 0.9101 97.40 93.42 0.57 (＞0.05) Y=1.1095X+4.5493，r=0.9686 达安TrFIA与新波ELISA 96.09 0.9226 97.44 94.67 0.17 (＞0.05) Y=1.0850X+5.5247，r=0.9566 2. 抗原抗体模式与HBsAg检测结果 TrFIA法HBsAg检测结果结合ELISA法相应标本其它HBVM结果，从1205例标本中共检测出10种抗原抗体模式，HBsAg阳性的模式共4种，TrFIA 法检测HBsAg阳性480例，其中ELISA法HBsAg弱阳性36例（0.5ng/ml—5.0ng/ml）和阴性20例（0.2ng/ml—1.0ng/ml,分布在“3+5”模式1例，“4+5”18例，“5”模式1例），TrFIA法定量检测未经稀释的HBV感染者血标本HBsAg浓度在0.2ng/ml—650ng/ml间，结果详见表2。

表2 TrFIA法结合ELISA法检测HBV M的抗原抗体模式与模式组的HBsAg浓度HBV M抗原抗体模式组例数（%） HBsAg浓度（ng/ml,X±SD）1+3+5a 157（13.0） 330.2±143.81+5b 12（0.996） 118.1±146.71+4+5c 306（25.4） 129.3±124.81d 5（0.415） 1.5±0.4HBsAg阴性模式e 725（60.2） 0.01±0.05注：组间HBsAg浓度差异采用秩和检验，a与b间差异有统计学意义（N=169，u c=4.89,P<0.05）；a与c间差异有统计学意义（N=463，u c=12.35,P<0.05）；a与d间差异有统计学意义（N=162，u c=3.71,P<0.05）；a 与e间差异有统计学意义（N=882，u c=18.41,P<0.05）；b与c间差异无统计学意义（N=318，u c=0.79,P>0.05）；b与d间差异有统计学意义（n2=5, n1-n2=7,T=27,P<0.05）；b与e间差异有统计学意义（N=737，u c=5.93,P<0.05）；c与d间差异有统计学意义（N=311，u c=3.22,P<0.05）；c与e间差异有统计学意义（N=1031，u c=9.81,P<0.05）；d与e间差异有统计学意义（N=730，u c=3.82,P<0.05）。

三讨论研究中2种方法4种试剂间HBsAg阳性检出率差异均无统计学(P>0.05)，3个厂家的TrFIA法试剂HBsAg定量检测结果相关性良好，r>0.95，但试剂间仍存在一定的“灰区”检测范围，仍存在HBsAg阳性检测不一致现象，提高试剂盒质量进而提高各试剂间的可比性是厂家亟需解决的问题。

HBsAg是HBV的外壳，它出现的早晚和它被清除的早晚与感染剂量、感染方式以及病情轻重有关[7]。

HBeAg或抗-HBe的出现与HBsAg的浓度呈一定的关系[8]。

研究中HBsAg 阳性模式中除“1+5”模式与“1+4+5”模式的HBsAg 浓度差异无统计学意义（P>0.05）外，其它HBsAg 阳性模式间HBsAg浓度差异均有统计学意义（P<0.05），HBsAg 阳性模式与HBsAg 阴性模式间HBsAg浓度差异均有统计学意义（P<0.05）。