在第四方案中，料水比为 1∶10，提取两次， 浓缩至 100 mL 后，按 2∶1 比例加入氯仿正丁醇(4∶ 1)沉淀蛋白质，离心后的上清液浓缩至 80 mL，加 入 2 倍体积 95%乙醇沉淀多糖，获得初多糖的提 取率为 4.43%。
2009 年 第 34 卷 第 7 期
食品科技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
提取物与应用
覆盆子多糖提取、结构分析及 自由基清除作用研究
刘明学， 牛靖娥， 苏忠伟， 王玉乔， 李 敏 (西南科技大学生命科学与工程学院，绵阳 621000)
摘要： 目的：研究活性覆盆子多糖的提取、结构分析与自由基清除作用。方法：以水提醇沉法
E(%)=(A0-A 样品)/A0×100 1.6.2 覆盆子多糖对超氧阴离子自由基(O2-·)的清 除作用 采用邻苯三酚自氧化体系。用移液管在 各管中加入 4 mL Tris-HCl(pH 8.2)，2 mL 邻苯三 酚溶液(10 mmol/L)。A 至 F 号管中加入梯度浓度覆 盆子粗多糖溶液各 2 mL；在 a 至 f 号管中加入梯 度浓度覆盆子纯化多糖溶液各 2 mL。在 0 号管中 加入 2 mL 超纯水，作为对照液。将各试管置于 37 ℃水浴中精确反应 10 min。水浴完成后，各支试 管加 1 mL 盐酸(6 mol/L，约 22%)溶液终止反应， 冷却至室温，并在 325 nm 波长下测各管溶液的吸 光度。记录数据。计算公式同上。
LIU Ming-xue, NIU Jing-e, SU Zhong-wei, WANG Yu-qiao, LI Min
(Life Science and Engineering College, Southwest University of Science and Technology, Mianyang 621000)
苷键。在相同的实验体系浓度下，覆盆子粗多糖及纯化多糖对 OH·的 IC50 分别为 1.37、0.91 mg/ mL；对 O2-·的 IC50 分别为 0.66、0.44 mg/mL。结论：覆盆子多糖为酸性 α-呋喃糖，且含 β－糖苷
键，对氧自由基具有较强清除能力。
关键词： 覆盆子；多糖；提取；结构；自由基清除
furanose with some β-glucosidic bond and had strong capacity of scavenging free radicals.
Key words: raspberry(rubus chingii hu); polysaccharides; extraction; structure; free radicals scavenging
Abstract: Objective: To study the raspberry(Rubus chingii Hu) polysaccharides(RPS) extraction, structure and
free radicals scavenging activities. Methods: The polysaccharides was extracted from raspberry by water and
覆盆子 Rubus chingii Hu 又称树莓、木莓、托 盘等，属于蔷薇科，悬钩子属植物，为多年生小 灌木。覆盆子果实富含鞣花酸、超氧化物、糖、 Vc，VB 等物质，具有延缓衰老，消除疲劳，提高 免疫力等功效。覆盆子已被世界公认为第三代黄 金水果，在国际国内市场上前景极为广阔。据分 析[1]，每 100 g 鲜果含蛋白质 0.2 g，脂肪 0.5 g，碳 水化合物 13.6 g，纤维 0.3 g，灰分 0.5 g，钙 22 mg， VA1 30 mg， VB1 0.03 mg， VB2 0.09 mg， 烟 酸 0.9 mg，Vc2 5 mg，VB9 0.20～0.25 mg，所含的各种 营养成分均易被人体吸收，具有改善新陈代谢， 增强抗病能力的作用，是老少皆宜的果中佳品。 覆盆子适应性很强，耐旱、耐瘠薄，有较强的抗 寒能力。我国的野生覆盆子十分丰富，分布较广。 大部分地区都能栽培，不择土壤，病害少。是一 种优良的果树资源，便于开发利用。
2 结果与分析
2.1 多糖提取 覆盆子多糖的提取目前尚无人研究，在本研
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提取物与应用
究中参照天麻多糖提取方法[4]和其他多糖提取方 法，比较了不同提取方法对提取效果的影响。
表 1 粗多糖提取参数与实验结果
收稿日期： 2009-03-03 基金项目： 四川省教育厅重点项目(041123)。 作者简介： 刘明学(1975—)，男，讲师，主要从事分子细胞生物学及生物活性物质研究工作。
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制备覆盆子粗多糖，CTAB 季铵盐络合法进一步纯化；通过 IR、NMR 等分析覆盆子多糖结构；
利用 Feton 体系和邻苯三酚自氧化反应，采用比色法测定覆盆子多糖对 OH·及 O2-·自由基的清除
作用。结果：通过实验获得覆盆子多糖提取工艺为料水比 1∶30、浸提温度 80 ℃、提取次数 2
次、氯仿正丁醇用量为 2∶1；红外光谱和 1H-NMR 分析覆盆子多糖为酸性 α-呋喃糖，且含 β－糖
采用水杨酸参与 OH·体系反应。各管用移液 管，按 2 mL FeSO4 溶液(5.0 mmol/L)、2 mL 过氧 化氢溶液(0.5%)、2 mL 水杨酸溶液(7.5 mmol/L)的 顺序加入溶液。A 至 F 号管中加入梯度浓度覆盆 子粗多糖溶液(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mg/mL) 各 2 mL；在 a 至 f 号管中加入梯度浓度覆盆子纯 化多糖溶液各 2 mL。在 0 号管中加入 2 mL 超纯 水，作为对照液。将各试管放入 37 ℃水浴培养 90 min。 水 浴 完 成 后 ， 取 出 冷 却 至 室 温 ， 并 在 510 nm 波长下测各管溶液的吸光度。记录数据。 按下式计算清除率 E(%)。
多糖纯度鉴定采用紫外光谱扫描法；多糖含 量测定采用硫酸－苯酚分光光度法。 1.5 覆盆子多糖结构分析
采用溴化钾压片法对样品进行红外光谱(IR)测 定以及核磁共振波谱(NMR)分析。将 30 mg 样品用 D2O 溶解交换 3 次，经 D2O 溶解后加入核磁管， 在 300 K 下测定(Bruker Avance 600)。红外光谱和 核磁共振由中科院成都生物研究所完成测定。 1.6 多糖溶液的自由基清除作用[5-6] 1.6.1 覆盆子多糖对羟基自由基的清除作用(OH·)
近几十年来，人们发现从植物中提取的多糖具 有非常重要与特殊的生理活性。具有抗肿瘤和免疫 促进，抗炎、抗病毒、抗凝血、降血糖、降血脂、 抗疲劳、抗衰老等作用[2]。已有文献报道，覆盆子 粗多糖具有明显的促进淋巴细胞增殖作用[3]。但覆 盆子多糖提取分离方面的报道未曾看到，其生理功 能及工艺开发有待进一步研究。本研究利用我国覆 盆子资源丰富，营养价值高的特点，对覆盆子中多 糖的提取方法进行了研究，初步分析多糖结构，研 究自由基清除活性。为进一步研究其生理活性和产 品开发奠定基础。
在第二方案中，料水比为 1∶26，提取两次， 浓缩至 150 mL 后，按 2∶1 比例加入氯仿正丁醇(3∶ 1)沉淀蛋白质，之后再加入 0.5 倍体积的氯仿正丁 醇(3∶1)溶液，离心后的上清液浓缩至 150 mL，加 入 3 倍体积 95%乙醇沉淀多糖，获得初多糖的提 取率为 5.53%。
在第三方案中，料水比为 1∶30，提取两次， 浓缩至 130 mL 后，按 1∶1 比例加入氯仿正丁醇(4∶ 1)沉淀蛋白质，之后再加入 0.5 倍体积的氯仿正丁 醇(4∶1)溶液，离心后的上清液浓缩至 80 mL，加入 4 倍体积无水乙醇沉淀多糖，获得初多糖的提取率 为 4.64%。
ratio was 2 ∶1. IR and 1H -NMR analysis indicated that RPS was composed of α -furanose with some β -
glucosidic bond. The respective IC50 of raw RPS and refined RPS to OH· was 1.37 mg/mL and 0.91 mg/mL, to O2-·was 0.66 mg/mL and 0.44 mg/mL. Conclusion: These results clearly indicated that RPS structure wasα-
中图分类号： Q 946.3
文献标志码： A
文章编号： 1005-9989(2009)07-0163-05
Extraction, structure and free radicals scavenging activities of polysaccharides from Raspberry(Rubus chingii Hu)
with
Fenton
reaction
and
O
· -
2
with
Pyrogallol
Autoxidation
Method
was
studied．
Results:
The
optimal
extraction
technology conditions were that the temperature was 80 ℃, the extraction time was twice, the Sevag reagent
实验号 1 2 3 4
原料加入量/g 100 30.2 33.59 50
水量/mL 1000 800 1000 500