(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910181850.9
(22)申请日 2019.03.11
(71)申请人 同济大学
地址 200092 上海市杨浦区四平路1239号
(72)发明人 袁伟忠　王春堯　汪芮　谢晓云　
刘阳　
(74)专利代理机构 上海科律专利代理事务所
(特殊普通合伙) 31290
代理人 叶凤
(51)Int.Cl.
C08L 1/28(2006.01)
C08L 5/08(2006.01)
C08J 3/075(2006.01)
C08B 11/20(2006.01)
C08G 65/332(2006.01)
C08B 37/08(2006.01)C08G 81/00(2006.01)A61L 26/00(2006.01)
(54)发明名称包载外泌体的自愈合水凝胶及其制备方法和应用(57)摘要本发明提供了一种包载外泌体的自愈合水凝胶及其制备方法和应用，制备方法为：将甲基纤维素与对醛基苯甲酸反应修饰为醛基化甲基纤维素；壳聚糖与甲基聚乙二醇通过酰胺化反应得到中性条件下可溶解的聚乙二醇化的壳聚糖；通过离心的方法从胎盘间充质干细胞上清液中分离得到外泌体，将外泌体、醛基化甲基纤维素和聚乙二醇化的壳聚糖混合后即可通过醛基化甲基纤维素上的醛基与聚乙二醇化的壳聚糖分子中的氨基形成动态可逆希弗碱的交联网络结构即可；该自愈合水凝胶在运动处皮肤创伤修复中可以应用；由于凝胶具有抗菌性和外泌体在凝胶中表现出的缓释作用，使得本发明的包载外泌体的自愈合水凝胶具有良好的生物相容性、良好
的自愈合性能和降解率。

权利要求书2页 说明书10页 附图4页CN 109912850 A 2019.06.21
C N 109912850
A
权　利　要　求　书1/2页CN 109912850 A
1.一种包载外泌体的自愈合水凝胶的制备方法，其特征在于：其包括步骤：
将醛基化甲基纤维素的磷酸盐缓冲液和聚乙二醇化的壳聚糖的磷酸盐缓冲液混合，得到混合物；将胎盘间充质干细胞外泌体加入所述混合物内搅拌，静置得到包载外泌体的自愈合水凝胶。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述醛基化甲基纤维素的磷酸盐缓冲液和聚乙二醇化的壳聚糖的磷酸盐缓冲液的体积比为1:1；
优选地，所述醛基化甲基纤维素的磷酸盐缓冲液中醛基化甲基纤维素的含量为10±1wt％，所述聚乙二醇化的壳聚糖的磷酸盐缓冲液中聚乙二醇化的壳聚糖的含量为3±1wt％。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述醛基化甲基纤维素的制备过程包括：
将甲基纤维素溶解在第一溶剂内得到第一混合物，将对醛基苯甲酸、二环己基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶溶解在所述第一混合物内，经过冷冻-抽真空-充氩气-冷冻后，反应得到第二混合物，所述第二混合物在第二溶剂内沉淀后，重新溶解于所述第一溶剂内，透析并干燥得到醛基化甲基纤维素。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述第一溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二乙基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二氯甲烷或三氯甲烷中的一种以上；
优选地，所述第二溶剂选自石油醚、正己烷、环己烷或乙醚中的一种以上。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述对醛基苯甲酸、所述二环己基碳二亚胺和所述4-二甲氨基吡啶的摩尔比为1:10:1.2-1.5:0.05:0.1；
优选地，所述反应的时间为12-24h；
优选地，所述透析的时间为2-5d。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述聚乙二醇化的壳聚糖的制备过程包括：
(1)将甲基聚乙二醇、琥珀酸酐、三乙胺和4-二甲氨基吡啶溶解在第三溶剂内反应得到第三混合物，反应结束后将所述第三混合物中的溶剂蒸干，并将残余物溶解在第四溶剂内，之后在第二溶剂内沉淀，过滤得到羧甲基化甲氧基聚乙二醇；
(2)将壳聚糖溶解在醋酸内得到第四混合物，将所述羧甲基化甲氧基聚乙二醇加入所述第四混合物内，将1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺溶解在第五溶剂内得到第五混合物，所述第四混合物和所述第五混合物反应结束后用碱液将其pH调整至中性，透析并冻干得到聚乙二醇化的壳聚糖。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，所述第三溶剂为1,4-二氧六环；
优选地，步骤(1)中，所述第四溶剂选自二氯甲烷或三氯甲烷中的一种以上；
优选地，步骤(1)中，所述甲基聚乙二醇、所述琥珀酸酐、所述三乙胺和所述4-二甲氨基吡啶的摩尔比为1:(1.5-2):1:1；
优选地，步骤(1)中，所述反应的时间为12-36h；
优选地，步骤(2)中，所述第五溶剂为去离子水；
优选地，步骤(2)中，所述反应的时间为4-8h；
2。