2020/10/8
药代动力学研究
• 动物 • 剂量 • 多次给药
– 药代动力学研究 – 组织分布研究
• 生物样本的药物测定方法
– 色谱法 – 放射性核素标记法 – 免疫学方法 – 微生物学方法
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药代动力学研究
• 方法学确证
– 选择性 – 灵敏度 – 准确度 – 精密度 – 重现性 – 稳定性 – 标准曲线——质控样品
脏器系数：12项 组织病理学检查：30项（非啮齿类33项） 恢复期
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局部用药特殊毒性研究
刺激性 给药部位的可逆性炎症改变
过敏性（变态反应或超敏反应）
特异性免疫反应，表现为组织损伤或生理功能紊乱，异常或病理性的
– Ⅰ型，快发或速发过敏型，IgE介导 – Ⅱ型，细胞毒型或溶细胞型，IgG介导 – Ⅲ型，免疫复合物型或血管炎型，IgG、IgM介导 – Ⅳ型，迟发型或结核菌素型，T淋巴细胞介导 – 光敏性
• 光毒性（光刺激性） • 光过敏性（光变态反应） ——Ⅳ型变态反应 溶血性
溶血及红细胞凝聚
– 免疫性溶血——Ⅱ型和 Ⅲ型过敏反应 – 非免疫性溶血
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刺激性
• 制剂 • 阴性对照 • 皮肤刺激性 • 注射给药部位刺激性 • 眼刺激性 • 其他途径给药部位刺激性
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新药研发临床前安全性评价
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新药的安全性及有效性
❖药理学研究
– 主要药效学 – 一般药理学 – 药代动力学
❖毒理学研究
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毒理学研究
• 急性毒性 • 长期毒性 • 局部特殊毒性 • 免疫毒性 • 遗传毒性 • 生殖毒性 • 致癌性 • 依赖性 • 复方制剂
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非临床安全性评价的主要不同
生物制品
小分子化合物
• 科学的，“case-by-case” 的设计思路
• 通过药理作用来选择相关动物 • 可采用一种动物 • 免疫原性非常重要 • 遗传毒性通常不要求 • 代谢研究通常不要求 • 两年的致癌性试验通常不要求 • 没有仿制品？
• 大多数品种的研究内容相似
遗传毒性（致突变）研究
❖鼠伤寒沙门氏菌营养缺陷型回复突变试验 （Ames试验 ）
➢阴性及阳性对照 ➢S9代谢激活
❖中国仓鼠肺成纤维细胞（CHL）染色体畸变试验
➢空白、溶剂、阳性对照 ➢S9代谢激活
❖啮齿生殖毒性研究
❖Ⅰ段 一般生殖毒性试验
✓雌性受孕、分娩、活胎与死胎、外观、骨骼与内脏等 ✓雄性生育能力
药理学研究
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主要药效学研究
❖ 体内和体外两种以上实验方法，其中一种必 须是整体的正常动物或模型动物
❖ 空白对照及已知阳性药物对照 ❖ 作用机制研究
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一般药理研究的特殊情况
追加的 补充的 可免做的
具体研究项 目
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• 血药浓度－时间曲线
➢ 药代动力学参数的估算（见后）
毒理学研究
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支持临床疗程超过2 周的药物II 期和III 期临床试验所需 动物长期毒性研究的最短给药期限
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检测指标
常规指标（一般症状、体重、摄食量） 血液学指标 ：10项 血液生化学指标 ：12项（非啮齿类16项） 尿液分析指标：9项（非啮齿类） 体温、血压、呼吸、心电图及眼科检查（非啮 齿类） 组织病理学检查
过敏性
• 注射给药
– 全身主动过敏试验（ASA） – 皮肤被动过敏试验（PCA）
• 经皮给药
– 豚鼠最大化试验（GPMT） – Buehler试验（BT）
• 吸入给药
– 豚鼠吸入诱导 – 刺激试验
• 皮肤光毒性试验 • 皮肤光过敏性试验 • 阳性和阴性对照
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溶血性
• 体外试管法（肉眼观察） • 分光光度法 • 阴性对照 • 阳性对照（视情况）
– 对小鼠迟发性变态反应的影响（DTH，细胞免疫功能 CMI）——放免/DNFB二硝基氟苯
– 淋巴细胞增殖试验：有丝分裂原（PHA，ConA， LPS ，PWM）刺激成淋巴细胞化作用
– NK细胞活性测定：乳酸脱氢酶（LDH）释放法
• 过敏反应-人源蛋白豚鼠价值很小，尚无可靠手 段
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评价目的
• 确定潜在的毒性靶器官和毒性反应出现的时 间、性质、程度及其可逆性
• 确定临床监测的安全性参数
• 推算人体使用的安全起始剂量以及随后的剂 量递增方案
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一般原则
✓具体问题具体分析——品种特点 ✓最大限度暴露毒性（如果临床上存在某些方面的安全 性担忧时则应进行该方面的非临床安全性研究） ✓执行GLP ✓毒性暴露结果向临床过渡，利弊权衡——重在“评价” ✓药理毒理研究的整体性、综合性、阶段性 ✓说明书：“严进”、“宽进”
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免疫毒性研究
• 评价潜在的免疫原性
– 检测血清抗体滴度 – 免疫复合物形成 – 间接引起生物活性分子释放
• 病理毒性（结合在长毒中观察）
– 淋巴器官称重 – 血液学，血细胞分类计数 – 免疫器官组织病理学检查
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免疫毒性研究
• 对免疫功能的影响
– 对脾抗体形成细胞（PFC）的影响（体液免疫功能HMI ）——溶血空斑试验
❖Ⅱ段 致畸敏感期毒性试验 胚胎毒性和潜在的致畸性
❖Ⅲ段 围产期毒性试验 子代动物
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致癌性研究
创新药 ❖ 短期致癌试验
哺乳动物培养细胞恶性转化试验 小鼠肿瘤诱发试验
❖ 长期致癌试验
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药物依赖性研究
具有精神神经作用的药物需要提供 ➢ 身体依赖性试
镇痛药、镇静催眠药 ➢催促试验 ➢诱导试验 ➢自然戒断试验或替代试验 ➢ 精神依赖性试验 ➢自身给药
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何谓具体问题具体分析？
CASE（要素）
➢ 产品的设计思路 ➢ 分子结构 ➢ 作用机制、活性特点 ➢ 安全性担忧 ➢ 相关动物 ➢ 免疫原性 ➢ 临床适应症、用药人群 ➢ 临床用药周期 ➢ 已有相关安全性信息 ➢ 技术、经济可行性等等
CASE（评价） 研究内容（重点） 研究阶段性 试验设计 结果评价
• 通过代谢来选择相关动物 • 要求采用啮齿和非啮齿类动
物进行试验 • 通常没有免疫原性 • 要求进行遗传毒性研究 • 要求进行代谢研究 • 要求进行两年的致癌性试验 • 有仿制品
• 药物的吸收 • 药物的分布 • 药物的排泄
➢ 尿粪排泄 ➢ 胆汁排泄 ❖ 物料平衡（Mass Balance）
• 药物与血浆蛋白的结合 • 代谢转化试验 • 对药物代谢酶活性的影响
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主要药代动力学参数
血药浓度－时间曲线下面积（AUC） 半衰期（t1/2） 吸收速率常数（Ka） 消除速率常数（Ke） 峰浓度（Cmax） 达峰时间（Tmax） 表观分布容积（Vd） 清除率（CL） 生物利用度（F）