polyjet转染技术讲解
11). 24,48小时后检测转染效率。
转染效率对比(摘于SignaGeet™ (µL):DNA (µg) is=3:1,也可以自己摸索调整。六孔板一个 孔加质粒1ug。
5).1ugDNA用50ul的高糖无血清培养基稀释, 轻轻地涡旋震荡(涡旋振荡器),简短的 离心(掌心宝离心机)。(标记为试剂1) 6).3ul PolyJet™ 试剂用用50ul的高糖无血清 培养基稀释,轻轻地涡旋震荡,简短的离 心。(标记为试剂2) 7).立刻将试剂2加到试剂1中。(注意:千万 不要将顺序弄反!!!!!)
8).将混合后的试剂轻轻地涡旋震荡,简短的 离心,室温孵育约15分钟,以形成 PolyJet™/DNA 复合物。(孵育时间不要超 过20分钟) 9).孵育完毕后,将试剂加到六孔板中,轻轻 地摇动六孔板,混匀。 10).转染12-18小时后更换新的培养基。对于 比较敏感的细胞,为减少细胞毒性,转染68小时后更换培养基。
以六孔板为例) 转染步骤(以六孔板为例) 1).转染之前铺板,待细胞密度达到90%-95% 进行转染(与转染小干扰时的细胞密度有 区别)。 2).转染之前30-60分钟换液,六孔板中每个孔 中加1ml的有血清培养基。 3).用高糖无血清培养基 serum-free DMEM with 高糖无血清培养基( 高糖无血清培养基 High Glucose)来稀释DNA和PolyJet™试剂。 (绝对避免用Opti-MEM来稀释PolyJet™试 剂和DNA, 它会破坏转染复合体)
技术讲解
质粒转染
1.质粒转染概念: 将外源质粒导入真核细胞的过程 。 2.质粒转染常见几种方法: (1)磷酸钙转染技术 (2)电穿孔DNA转移技术 (3)脂质体载体法 (4)基因显微注射技术
新的转染试剂
SignaGen体外 体外DNA转染试剂 转染试剂-PolyJet™ 体外 转染试剂 (只用来转染质粒DNA!!!!!!!)