但是化学凝聚法也存在许多不足，比如在处理 后的发酵液离心后所得的上清液中任然存在一定 量的蛋白，如果发酵液染菌则处理效果更不明显， 上清液浑浊，严重影响了产品的品质和收率。此 外，化学凝聚法在操作过程中也会对环境造成污 染。
③超滤法
超滤是一种新兴的膜处理技术，此法具
有操作方便、节能、不造成新的环境污染
注意： 在生产中，第一步要严格控制反应 过程的pH为8.0～8.5，避免葡萄糖的C-2位差 向异构物被还原成甘露醇。整个发菌期间， 要保持葡萄糖酸杆菌数量的一定，小菌将L山梨糖转化为2-酮基-L-古龙酸，而大菌本身 不产酸，是搭配菌，其作用仅是通过刺激小 菌的生长而促进小菌产酸。2-酮基-L-古龙酸 首先在甲酯中用浓硫酸催化酯化成2-酮基-L古龙酸甲酯，再加入碳酸氢钠转化成维生素C 盐，经离子交换树脂酸化，在50～55℃下减 压烘干即得粗品。
②碱转化法 我国 VC生产厂家均采用碱法转化2-酮基-
l-古龙酸生产VC。东北制药总厂等生产单位将 2-酮基-L-古龙酸与甲醇在浓硫酸催化下生成2酮基- L-古龙酸甲酯，该酯在NaHCO3作用下发 生内酯化反应生成VC钠盐。该法避免了酸催化 的上述缺点，且操作工艺简单，反应条件温和， 适合于规模化生产，但是在生产中的反应周期 过长，甲醇单耗高。有些单位尝试用CH3ONa代 替NaHCO3进行碱转化，转化率可高达92.6%，但 产品质量较差，且甲醇钠价格贵，造成生产成 本较高。
H C OH
H2C
OH
H2C
OH
H2C OH
H2C OH
L-抗坏血酸
D-抗坏血酸
L-异 抗坏血酸
D-异抗坏血酸
维生素C的性质
白色粉末，无臭、味酸、熔点190192℃，易溶于水，略溶于乙醇，不溶于 乙醚，氯仿及石油醚等。它是一种还原 剂，易受光、热、氧等破坏，尤其在碱 液中或有微量金属离子存在时，分解更 快，但干燥结晶较稳定。
O
C
H
CH2O 双丙酮-L-古龙酸
COOH
C
O
H2O
HO
C
H
H
C
OH
HO
C
H
CH2OH
2-酮基-L-古龙酸
内酯化 烯醇化
O
C
HO
C
O
OH
C
H
C
HO
C
H
H2C OH 维生素-C
CH3 CH3
2·二步发酵法
二步发酵法是相对莱氏法而言的，是 中国科学院微生物研究所和北京制药厂于 1975年合作发明的，此法进一步发展了维 生素C的生产，是目前唯一成功应用于维生 素C工业生产的微生物转化法。
（4）能耗 两步发酵法比莱氏法高出15 ％。
（5）总收率（对山梨醇） 莱氏法比两 步发酵法高出10％左右，主要原因是 第二步微生物氧收率仍较低。
（6）安全 两步发酵法由于革除了丙酮、 苯（或甲苯）、氯气等大量易燃易爆 或有毒的化工原料，有利于安全生产。
参考文献
• 【1】微生物所发明维生素C生产二步发酵法25周年纪实 • 【2】陈来同等. 生物化学产品制备技术.北京：科学技术
以当年北京制药厂年产150吨维生素C车间 为例，采用二步发酵法新工艺后，每年可 节约丙酮297吨（相当于237.8万斤粮食）； 节省其他化工原料2600多吨和主要设备58 台；降低了原料成本10%。据报，目前国内 已有年产3万多吨维生素C的生产能力，若 全部开动生产，其产生的经济效益和社会 效益、生态环保效益是无法估量的。
HO C H
CH2OH D-山梨醇
CH2OH L-山梨醇
CH2OH 2-酮基-L-古龙酸
H2C OH 维生素-C
（2）工艺过程
a 第一步发酵 以D-葡萄糖为原料，加 氢催化生成D-山梨醇，再加入假单孢杆菌 氧化获得L-山梨糖。
b 第二步发酵 L-山梨糖通过小菌氧化 葡萄糖酸杆菌和大菌巨大芽孢杆菌、蜡状 芽孢杆菌等伴生菌混合发酵得维生素C前体 2-酮基-L-古龙酸。
过程为山梨醇发酵生成山梨糖后，山 梨糖又经第二步细菌氧化，直接生成2-酮 基-L-古龙酸，而废除了丙酮化和化学氧化 两个步骤。
(1) 工艺路线
第一步：
D-葡萄糖
H2/催 化
D-山梨醇
黑醋酸菌 L-山梨糖
第二步：
大菌、小菌
内酯化
L-山梨糖
混合发酵
2-酮基-L-古龙酸
维生素C
烯醇化
CH2OH
HO C H HO C H H2
氢化 H C OH
HO C H
CHO D-葡萄糖
O
CH2OH
CH2OH
COOH C
HO C H HO C H O2
CO HO C H
CO
内酯化 HO C
HO C H 烯醇化
O
Acetobacter
Pseudomonas
H C OH
H C OH
H C OH
OH C
HC
HO C H
HO C H
HO C H
工艺路线
[加氢]
[酶菌氧化]
[酮化]
H2
D-葡萄糖
D-山梨醇
O2
L-山梨糖 H2SO4丙酮
双 丙 酮 - L - 山 梨[氧化] NaOH, O2, KMnO4 双丙酮-L-古龙酸 糖
[酸化] HCl
[转化]
2-酮-L-古龙酸
维生素C
HO HO
CH2OH
C
H
C
H
H2
H
C
OH
HO
C
H
CHO D-葡萄糖
②化学凝聚法 化学凝聚法是通过加入化学絮凝剂来除
去蛋白质、菌体、色素等杂质，避免了加热沉 淀时有效成分的损失。季光辉等采用化学凝聚法 对VC发酵液进行预处理，使2-酮基-L-古龙酸的滤 液质量提高，提取前步收率提高5.2%，VC总收率 提高2.5%以上。以壳聚糖为主凝剂，聚丙烯酰胺 为助凝剂，通过化学凝聚法除蛋白工艺。提取收 率由原来的76%提高到82%，古龙酸优级品率由原 来的35%提高到60%, 成本比原来降低20%。
维生素C的化学结构
维生素C(多羟基不饱和内酯衍生物)分子
中有两个手性碳原子，故有4种光学异构体，
其中L（+）抗坏血酸效果最好，其他三种
临床效果很低或无效。
OC
OC
CO
CO
C OH O
C HO
C OH OO
C HO
C OH O
C HO
C OH C HO
HC
HC
CH
CH
HO C H
H C OH
OH C H
等优点，因此在2-酮基-L-古龙酸的分离提纯中的 应用日益广泛。此法与加热沉淀法不同的是，可 在常温下操作，可减少有效成分的损失；在用膜 除蛋白的过程中，无任何新的化学物质加入，可 减少对树脂的污染和损耗，降低酸碱用量，减少 三废排放。与化学凝聚法不同的是，在处理染菌 的发酵液时仍可达到较好的处理效果。我国的东 北制药厂1995年从丹麦引进目前全国最大膜面积 的平板超滤装置后， 2 -KLG的分离提纯成本比原 先的化学凝聚法节约了600万元，其收率和生产的 自动化、连续化程度也明显提高。
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实用药物与临床，2005(8):1-2
HO HO
CH2OH
C
H
C
H
O2
H
C
OH
HO
C
H
CH2OH D-山梨醇
CH2OH
C
O
HO
C
H
H
C
OH
HO
C
H
CH2OH L-山梨醇
H3C
(CH3)2CO O
H2SO4
H3C
H
CH2OH C
C
H
C
O
C
H
CH2O 双丙酮-L-山梨糖
O2
CH3
KMnO4 NaOH
CH3
H3CCOOH CO H NhomakorabeaCC
H
H
C
c 提取 采用弱碱性离子交换树脂从发酵 液中直接提取2-酮基-L-古龙酸（新工艺）， 用甲醇-硫酸溶液洗脱,将洗脱液直接内酯 化、烯醇化为维生素C（新工艺）。
d 精制 将上述维生素C通过活性炭脱色， 于结晶罐内加入晶种结晶，冷乙醇洗涤， 低温干燥，即可获得精品维生素C。
①加热沉淀法
加热沉淀法是2-酮基-L古龙酸分离提纯的传 统工艺，分离手段较为落后。此工艺通用氢型树 脂，调 pH至蛋白质的等电点后加热除蛋白。采用 此工艺会造成有效成分在高温下降解损失，且发 酵液直接通过树脂柱，造成树脂表面污染，降低 树脂的交换容量和收率。两次通过树脂柱带进了 大量水分，也增大了浓缩耗能。
维生素C的生产方法
莱氏法:是维生素C生产的经典方法，是由 Reichstein和Grussner研究开发的。系以葡 萄糖作为起始原料，经催化加氢制成D-山梨 醇，再经醋杆菌深层发酵氧化制得收率很高 的L-山梨糖，L-山梨糖经丙酮和硫酸处理 （生产上俗称丙酸化）生成双丙酮-L-山梨 糖（简称双酮糖），再用苯或甲苯提取，提 取液经水法除去单酮山梨糖后蒸去溶剂而后 分离出来，用高锰酸钠氧化、水解、酯化、 转化、中和便得VC。