百分之一。
要对天然质粒进行人工改造
作为载体必须具备哪些条件？
1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存；
2、具有多个限制酶切点，以便与外源基因 连接；
3、具有某些标记基因，便于进行筛选。 （如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色 反应的基因等 ）
4、对受体细胞无害
原核细胞的基因结构(补充内容）
非编码区 编码区上游
切点：磷酸二酯键
举例：EcoRI限制酶能识别 GAATTC序列，并 在G和A之间切开 （黏性末端）
SmaI限制酶能识别 GGGCCC序列，并 在G和C之间切开 （平末端）
限制酶所识别的序列有什么特点
限制酶所识别的序列，无论是6个碱 基还是4个碱基，都可以找到一条中 心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的 碱基是反向对称重复排列的。
➢退火：冷却至55～60℃ 变性 部分引物与模板的单链 DNA的特定互补部位相配 对和结合
PCR技术
原理： DNA复制 前提：
一段已知目的基因的核苷酸序列 原料
模板DNA；DNA引物；四种脱氧 核苷酸；热稳定DNA聚合酶 （Taq酶）；离子
方式：以_指__数__方式扩增，
PCR扩增仪
即_2_n__（n为扩增循环的次数）
过程 变性、退火、延伸三步曲
➢变性：加热至90～95℃ 双链D的基因
PCR——聚合酶链式反应 是一项生物体外复制特定DNA片
段的核酸合成技术。通过此技术，可 获取大量的目的基因。
外显子 内含子
真核 细胞
的
编码区 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列
基因
结构 非编码区 ：有调控作用,上游有启动子，下
游有终止子
非编码序列： 包括非编码区和内含子
原核细胞与真核细胞的基因结构比较
不同点 相同点
原核细胞
真核细胞
编码区是 _连__续__的
编码区是间隔的、 不__连__续_的
1．1、1.2 DNA重组技术的基本工具 基因工程的基本操作程序 （一轮复习课） 2011、1、7
考纲要求：
(1)基因工程的诞生（A级要求） (2)基因工程的原理和技术(A级要求） (3)基因工程的应用(B级要求） (4)蛋白质工程(A级要求）
基因工程的概念
基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通 过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的 遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和
DNA连接酶与DNA聚合酶的比较
DNA连接酶 DNA聚合酶
作用实质
都是催化两个脱氧核苷酸 之间形成磷酸二酯键
是否需模 板
不需要
需要
连接DNA 链
双链
单链
作用 过程
作用 结果
DNA连接酶 DNA聚合酶 将单个脱氧核苷
在两个DNA片 酸加到已存在的 段之间形成磷 核酸片段的3′
酸二酯键 端的羟基上，形 成磷酸二酯键
启动子
编码区
非编码区 编码区下游
终止子
与RNA聚合酶结合位点
原核 细胞 的 基因 结构
编码区 ：编码蛋白质 ,连续不间断
①不编码蛋白质。 非编码区 ②调控遗传信息表达,上
游有启动子，下游有终止子
真核细胞的基因结构（补充内容）
非编码区
编码区上游
编码区
非编RNA聚合酶
结合位点
都由能够编码蛋白质的_编__码__区_和具 有调控作用的非__编__码__区组成的
基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定
一、目的基因的获取
1、目的基因主要是指__编__码__蛋__白__质__的__结__构__基__因__
限制性内切酶
EcoRI 限制
酶
限制酶在原核生物中的作用
限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使 之失效，从而达到保护自身的目的。
含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中不具备这 种限制酶的识别序列
DNA连接酶
常用的DNA连接酶：
①E·coli DNA 连接酶来 作源 用特：点大肠：只 杆菌连接黏性末端 ②T4DNA 连接酶来作源用：特点T4噬：菌连体接黏性末端和平末端
外源基因在受体内表达的理论基础： 生物界共用一套遗传密码
DNA重组技术的基本工具
限制性核酸内切酶——“分子手术刀” DNA连接酶——“分子缝合针” 基因进入受体细胞的载体——“分子运
输车”
限制性核酸内切酶——“分子手术刀”
分布：主要在原核生物中
作用特点：特异性，即识别 特定核苷酸序列，切 割特定切点
生物产品。
基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术
操作环境
生物体外
操作对象
基因
操作水平 基本过程
结果
DNA分子水平 剪切→拼接→导入→表达
人类需要的基因产物
原理：基因重组 优点：定向改造生物体的性状（目的性强）
育种周期短，克服远缘杂交不亲和障碍
为什么基因工程能够成功呢？
基因拼接的理论基础： 规则的双螺旋结构 基本单位都是脱氧核NA 片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌 基因？ 目的基因的DNA分子
合成新的DNA分 子
基因的载体——“分子运输车”
载体的作用： 1、将外源基因转移到受体细胞中去。 2、利用运载体在受体细胞内，对外源基 因进行大量复制。
常用的载体有： 质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒
等
质粒
质粒是基因工 程最常用的运载体， 它广泛地存在于细 菌中，是细菌染色 体外能够自主复制 的很小的环状DNA 分子，大小只有普 通细菌拟核DNA的