剂均为国产分析纯 。 仪器 : CS —9000 型薄层扫描仪 (日本岛津公司) ,硅胶 G
板 (日本) ,定量毛细管点样器 (DRUMMOND U. S. A) , RE540 薄膜 ,旋转蒸发仪 (日本大和公司) ,FD —230 红外水份测定仪 (日本大和公司) ,10 万分之一天平 (日本岛津) 。 1. 2 方法 1. 2. 1 薄层层析展开剂条件的摸索 首先采用纸层析做预 备实验 ,摸索层析展开剂条件 ,然后利用此展开条件在硅胶 G板上展开 ,具体做法为 : 取硅胶 G 板 ,于 105 ℃活化 0. 5 h 后点样 ,置于展开剂中直立上行展开 17 cm 取出 ,60 ℃烘干 ,
is 0. 548 % .
Key Words : TLC ; Polygonum cuspidatum ; resveratrol ; content test
虎杖 ( Polygonum Cuspidatum Sieb et Zucc) 为蓼科蓼属小灌 木 ,广泛分布于华东 、中南 、陕西 、甘肃 、四川等地区 ,为我国 传统中 药[1] 。其 根 茎 具 有 活 血 、清 热 利 湿 、止 咳 化 痰 等 作 用[2] 。现代药学研究证明其具有多种药理作用 ,发现其所含 主要活性成分白藜芦醇 ( Resveratrol) ,其化学名称为反式 3 , 5 ,4 ′—三羟基 1 ,2 —二苯乙烯 (trans —3 ,5 ,4 ′—trihydroxystilbene) , 具有抗癌[3] 、抗高血压和冠状动脉血管扩展活性 ,可以降低 大鼠的血清中总胆固醇 ,还有降血脂等作用 ,可有效地抑制 血管细胞中组织因子 TF 和细胞质的异常表达 ,防止心血管 疾病发生等方面的功能[4] 。目前至少已在 21 个科 ,31 个属 的多种植物中发现了白藜芦醇 ,在这些植物中 ,虎杖 ( Poly2 gonum cuspidatum Sieb et Zucc) 白藜芦醇的含量是最高的[5] 。 目前国内主要采用 HPLC 法进行白藜芦醇含量测定 ,没有统 一测定标准[6] 。而薄层扫描法 ( TLC 法) 广泛用于中药检测 中 ,具有精度高 、速度快 、成本低等特点 。而 TLC 法测定虎杖
称取虎杖鲜叶 、鲜茎 、鲜根茎各 25 g ,虎杖干粉 10 g ,用快 速水份测定仪测定样品含水量 ,分别加入适量的乙酸乙酯研 磨匀浆 。将鲜根茎 、鲜叶 、鲜茎乙酸乙酯提取液定容到 250 ml ,干根粉乙酸乙酯提取液定容至 100 ml ,放在 4 ℃冰箱中 , 静置浸泡 48 h 后用砂芯漏斗过滤 。
湖南林业科技 2005 年第 32 卷第 3 期
研究报 告
TLC 法测定虎杖中白藜芦醇的含量
周国海1 , 于华忠1 , 李国章1 , 曹 庸1 , 饶力群2 , 龙维珍3 , 唐忠海2
(1. 湖南省林产化工工程重点实验室 , 湖南 张家界 427000 ; 2. 湖南农业大学 , 湖南 长沙 410128 ; 3. 张家界市林业科学研究所 , 湖南 张家界 427000)
Abstract : A thin layer scanning method was established for the determination of resveratrol in Polygonum cuspidatum. Using silica gel as the layer plate and CHCl3 —CH3COCH3 —CH3COOH —H2O (4∶4∶0. 5∶0. 2) as the developing system , scanning by ultra2light (306 nm) . The linearity is Y = (13. 826 S 3 10 - 6) - 0. 869 8 ( Y : the content of reseveratrol ug / ml , S : area of the peak) . And determine content of resveratrol in rootstems、roots、leaves of Polygonum cuspidatum. The result shows that the content of resveratrol in fresh rootstems of Polygonum cuspidatum
的虎杖白藜芦醇含量 (见表 3) 。 2. 4 回收率测定
从表 4 可以看出 ,采用 TLC 法测定虎杖中白藜芦醇回收 率较高 ,为 100. 6 %。
表 3 稳定性测定结果
样品
标样 (440 ul / ml) 鲜根茎 1 鲜根茎 1 鲜根茎 1 鲜根茎 1 鲜根茎 1 鲜根茎 1
点样量 (ul)
1. 2. 4 稳定性测定 取同一样品点于同一薄层板上 ,按上
述方法层析展开 、扫描 ,根据面积计算相对偏差 。
1. 2. 5 回收率测定 取一已测样品 (纯白藜芦醇量为 B ) 与
同体积标样 (纯白藜芦醇量为 D) 混合点于同一薄层板上 ,按
上述方法层析展开 、扫描 , 并计算出混合样中纯白藜芦醇量
展开不均匀 ,拖尾 展开不均匀 ,拖尾 展开为均匀 ,拖尾 分层不好 分层不好 拖尾 ,分层不好 拖尾 ,分层不好 拖尾 ,分层不好 分层较好 ,不够均匀 分层较好 ,不够均匀 分层很好 ,均匀
图 1 样品含量测流程
用定量毛细管点样器分别吸取系列白藜芦醇标准液各 5 ul ,样品液 5 ul ,点于同一薄板上 ,依上述实验条件展开 ,扫描 测定 ,测定结果见表 2 。
2 2 2 2 2 2 2
扫描面积 (mm2) RSD( %)
98 567
30 109
31 400
29 031
4. 6
30 801
31 007
28 157. 9
表 4 TLC 法回收率测定
11
氯仿∶丙酮∶乙醇∶水
1. 2. 2 薄层扫描条件 扫描方式 : 反射法单波长锯齿扫描 ,
波长 : 306 nm ,狭缝 : 1. 25 ×1. 25 ,线性化系数 sx = 1 ,背景校
正 : ON。
1. 2. 3 标准曲线绘制 精密称取白藜芦醇对照品 7. 8 mg ,
用甲醇定容至 10 ml ,从中分别吸取 0. 5 、1 、1. 5 、2 、2. 5 ml ,置
Detecting content of resveratrol in Polygonum cuspidatum by TLC
ZHOU Guo2hai1 , YU Hua2zhong1 , LI Guo2zhang1 , CAO Yong1 , RAO Li2qun2 , LONG Wei2zhen3 , TANG Zhong2hai2
表 2 虎杖样品含量测定
样品名称
鲜茎 鲜根茎 鲜叶 虎杖粉
样品重 样品含水量 峰面积
(g)
( %)
(mm2)
25
44. 0
476 537
25
46. 6
774 836
25
46. 8
41 541
10
10
86 608
样品中 Resv 百分 含量 ( %)
0. 033 7 0. 548 0 0. 030 5 0. 061 3
摘 要 : 本文建立了虎杖白藜芦醇含量测定的薄层扫描分析方法 : 以硅胶 G为薄层吸附剂 ,氯仿∶丙酮∶乙酸∶水 (4∶4 ∶0. 5∶0. 2) 为展开剂 ,在紫外灯 (365 nm) 下观察荧光斑点 ,在 365 nm 处并进行扫描测定 ,线性方程为 : Y = (13. 826 S 3 10 - 6) - 0. 869 8 ( Y 为白藜芦醇浓度 ug/ ml , S 为峰面积) 。并对虎杖茎 、根 、叶进行了含量测定 。结果表明 : 用 TLC 法 测定虎杖中白藜芦醇含量方法简便 、快捷 、准确度高 、重复性好 。虎杖鲜根茎中含量达 0. 548 %。 关键词 : TLC 法 ; 虎杖 ; 白藜芦醇 ; 含量测定 中图分类号 : S 567. 1 + 9 文献标识码 : A 文章编号 : 1003 —5710 (2005) 03 —0011 —03
(1. Key Lab. of Hunan Forest Products & Chemical Industry Engineering , Zhangjiajie 427000 , China ; 2. Hunan Agricultural Univ. , Changsha 410128 , China ; 3. Zhangjiajie Forestry Science Institute ,Zhangjiajie 427000 , China)
A ,减去已知样品的纯白藜芦醇量 B ,则剩余纯白藜芦醇量 A
- B (即测得的标样中纯白藜芦醇量) ,其回收率为 :
A
D
B
×100
%
2 结果
2. 1 展开剂条件的确定 从表 1 可以看出 ,在 11 种展开剂中 ,氯仿 —丙酮 —乙酸 —
水 (4∶4∶0. 5∶0. 2) 作为展开剂展开分层很好 、不拖尾 、均匀 ,故 以此为展开剂 。 2. 2 样品含量测定
收稿日期 : 2005 —01 —15 修订日期 : 2005 —04 —20
பைடு நூலகம்
中白藜芦醇尚未见报道 ,为此本文对薄层扫描法测定虎杖中 白藜芦醇含量的方法进行了研究 。
1 实验
1. 1 材料 、仪器与试剂 材料 : 虎杖 ,采于张家界市三角坪吉首大学校园内 ,阴
干粉碎 。 试剂 : 白藜芦醇标准品 (购于 Sigma 公司) , 其它所用试
滤液在 45 ℃减压条件下分别浓缩去掉乙酸乙酯 ,用甲 醇溶解并定容至 10 ml 。作为样品溶液 (即待测液) 。以上操 作流程见图 1 :
8∶1∶1 8∶1∶2 4∶1∶2 8∶1∶1 4∶4∶0. 5∶0. 2 30∶10∶0. 5 4∶4∶0. 5∶0. 2 4∶4∶1∶0. 5 4∶4∶0. 3∶0. 2 4∶4∶0. 2∶0. 2 4∶4∶0. 5∶0. 2