三、微生物培养技术
1、步骤：
（1）配制培养基
（2）灭菌：高压蒸气灭菌
（3）倒平板：把培养基分装培养皿
（4）接种：分散菌种、形成菌落 方法：平板划线法、稀释涂布平板法
2、应用：
(1)土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
[1]选择培养基：唯一氮源--尿素 [2]步骤：土壤溶液→稀释→ 接种→菌落计数
（2）土壤中分解纤维素的微生物的分离
初花期、未开放花蕾、单核期 1、花药选取： 2、培养过程：
花粉（脱分化）→愈伤组织
↓（脱分化）
↓（再分化）
胚状体（分化） → 丛芽→诱导生根
3、花粉发育检查： （1）醋酸洋红法（细胞核红色）
（2）焙花青-铬矾法（细胞核蓝黑色）
实例：就水稻花药培养的步骤，请回答下列问题： 对花蕾消毒 选取水稻花药 接种和培养 植物体
豆腐长毛霉后→加盐腌制→瓶装卤汤→密封腌制
4、盐与酒精： 抑制微生物生长
四、泡菜制作
1、乳酸菌： 原核、分裂生殖、异养厌氧 2、原理： C6H12O6→2C3H6O3 3、流程： 洗菜叶、加盐水、装坛、密闭 4、测定亚硝酸盐：
在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生 重氮化反应后，再与N-1－萘基乙二胺盐酸盐结合生成 玫瑰红溶液。
[1]选择培养基：碳源--纤维素 [2]原理：纤维素 纤维二糖
C1酶、CX酶
葡萄糖
葡萄糖苷酶
纤维素+刚果红→红色物；若纤维分解→则有透明圈
实例：分解尿素的细菌的分离与计数
（1）右表所示的培养基不能用于植物组织培养 的理由是 缺少植物激素 。 （2）培养基中加入尿素的目的是筛选 目的菌 。 （3）“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来 尿素 葡萄糖 自培养基中的 和 ，实验需要振荡 培养，原因是 为目的菌提供氧气
二、无菌技术
1、消毒： 温和方法杀死表面部分有害微生物煮 沸、药剂（如：75%酒精）
2、灭菌： 强烈方法杀死一切微生物、孢子和芽孢
（1）灼烧灭菌： 接种环、试管口 （2）干热灭菌： 玻璃器皿、金属用具（也可蒸气灭菌） （3）高压蒸气灭菌： 培养基、无菌水
注：芽孢是细菌产生的休眠结构， 而孢子是真菌、低等植物等的无性繁殖细胞。
专题6：生物材料中成分的提取
提取方法：
1、水蒸气蒸馏法：水蒸气+芳香油→混合物→油层和水层 玫瑰精油：玫瑰花+清水→乳浊液 NaCl：促进乳化液分层；无水Na2SO4：除水 2、萃取法：芳香油+有机溶剂→溶液→芳香油（去溶剂） 胡萝卜素：橙黄色、易溶石油醚
水浴加热→萃取液→蒸发溶剂→胡萝卜素
3、压榨法：浸泡、漂洗、压榨、过滤、静置 橘皮精油：石灰水浸泡、NaHCO3、Na2SO4 促进油水分离
1.选取的水稻花药应为①期，此时细胞核由中央移向细 胞一侧，花药培养成功率最高． 2.通过花药培养产生单倍体植株一般有两种途径：一种 是花粉通过②阶段发育为植株，另一种是在诱导培养基上先 形成③再将其诱导分化成植株． 3.试管苗形成过程中，必须从培养基中获得无机盐或矿 质元素和小分子有机物质等营养物质．要促进花粉细胞分裂 和生长，培养基中应有④和⑤两类激素 ①单核 ②胚状体 ③愈伤组织 ④细胞分裂素 ⑤生长素
KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4· 7H2O 葡萄糖 尿素 琼脂
1.4 g 2.1 g 0.2 g 10 g 1 g 15 g
将上述物质溶解后，用蒸馏 水定容到100 mL
（4）转为固体培养基时，常 稀释涂布平板法或平板划线法 的方法接种。 （5）下列材料或用具：①培养细菌用的培养基与培养皿，②玻棒、试管、锥 ①和② 形瓶和吸管，③实验操作者的双手。其中需要灭菌的是： ；需 ③ 要消毒的是： 。（填序号） （6）在进行分离分解尿素的细菌实验时，A同学从培养基上筛选出大约150个 菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能 ①②③ 有 （填序号） ①由于土样不同 ②由于培养基污染 ③由于操作失误 ④没有设置对照 （7）实验结束后，使用过的培养基应该进行 灭菌 处理后，才能倒掉。
18－25 （3）制作果酒，需将温度严格控制在________℃。 制作果酒后制果醋，应将温度控制在30 __________ —35℃ 。
（4）葡萄汁装入发酵瓶时， 要留有大约1/3的空间，这 既为酵母菌大量， 是因为_____________ 繁殖提供适量的氧气，又 _____________________ 防止发酵旺盛时汁液溢出 ____________________。
专题3
植物的组织培养技术
一、菊花组织的培养
1、原理：植物细胞的全能性 （1）制备MS固体培养基（灭菌） 2、步骤： 无机盐、维生素、蔗糖、植物激素 （2）外植体消毒
（3）接种、培养、移栽
脱分化--愈伤组织--再分化--从芽--诱导生根
PH：5.8、温度：18-22、每日光照：12h
二、月季花药培养
明火加热，而采用水浴加热的方法。通过加热处理，β-胡萝 卜素溶解在萃取液中；再经 过滤 得到萃取液；经过 蒸馏 后， 可 浓缩 得到纯净的β-胡萝卜素。
生物（选修1）
生物技术实践
专题1：传统生物技术的应用
一、果酒制作
1、酵母菌： 真菌、出芽生殖、兼性厌氧、20度 2、原理： C6H12O6→2C2H5OH+2CO2+2ATP 3、流程： 选果→冲洗→榨汁→发酵→酒精
4、检验： 酸性条件酒精遇重铬酸钾呈灰绿色
二、果醋制作
原核、分裂生殖、异养需氧、30度 1、醋酸菌：
2、原理： （1）C6H12O6+2O2→2CH3COOH+2CO2+H2O
（2）C6H12O6→2C2H5OH+2CO2 C2H5OH+O2→CH3COOH+H2O
3、流程： 选果榨汁→酒精发酵→醋酸发酵
例：有酿制葡萄酒的两个简易装置，请回答：
（1）果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌在 有氧无氧条件下都能生存，所以，它属于 兼性厌氧型 ________微生物。 （2）在葡萄酒的自然发酵过程中，酵母菌的 来源是 附着在葡萄皮上的野生型酵母菌 。
将经过反应显色后的泡菜待测样品与标准液比色， 即可估算出样品中的亚硝酸盐含量。P10
专题2：微生物的培养与应用
微生物的培养
一、培养基：
1、概念： 微生物生长的营养物质 2、成分： 水、无机盐、碳源、氮源
3、种类： 液体培养基、固体培养基（琼脂）
4、选择培养基： 比如：青霉素培养基（杀细菌、留真菌）
（5）甲装置中，A液体是葡萄汁 _____，NaHCO3溶液的 作用是 吸收酵母菌酒精发酵产生的CO2 。
若用乙装置，在发酵过程中，必须进行的操作 是 每隔12小时左右（一定的时间）将瓶盖拧松一次 。 与乙装置相比，甲装置的优点是 既能及时排除（发酵 。 。 产生的）CO2，又能减少被杂菌污染的机会
例：几个有关萃取的问题： （1）萃取剂可分为 水溶性 和 水不溶性 两种。
(2)萃取的效率主要取决于 萃取剂的性质和使用量 。
受 原料颗粒的大小、紧第一步需 将胡萝卜进行粉碎和干燥 ， 以提高萃取效率。因为 有机溶剂都是易燃物 ，所以应避免
重铬酸钾 （6）果汁发酵后是否有酒精产生，可用 来检验。在酸性条件下，该试剂与酒精反应呈 现 灰绿色 。在果酒酿造过程中，如果果汁灭菌 不严格，含有醋酸杆菌 ，在酒精发酵旺盛时， 醋酸杆菌能否将果汁中的糖发酵为醋酸?
不能，因为醋酸杆菌是好氧菌 答：
三、腐乳制作
1、毛霉： 真菌、孢子生殖、异养需氧、18度 2、原理： 毛霉的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解为 小分子的肽和氨基酸；脂肪酶能将脂肪分 解为甘油和脂肪酸。 3、流程：