注射用重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子原液相关蛋白检测
依法测定（通则 0512）。

色谱柱采用四烷基硅烷键合硅胶为填充剂（如： C 4 柱，4.6mm×15cm，粒径 5μm 或其他适宜的色谱柱），柱温为室温；以 0.1%
三氟乙酸的水溶液为流动相 A ，以 0.1%三氟乙酸-90%乙腈的水溶液为流动相B ；流速为 1.2ml/min ；在波长 214nm 处检测；按下表进行梯度洗脱。

用稀释液（pH7.0 的磷酸盐缓冲液）将供试品稀释至每 1ml 中约含 0.5mg ，
作为供试品溶液；用稀释液将对照品稀释至每 1ml 中约含 0.5mg ，作为对照品溶液 A ；取对照品溶液 A 与每 1ml 中约含 0.125mg 的人或牛血清白蛋白溶液 （溶剂为稀释液），按体积比 1:4 混匀作为对照品溶液 B 。

取供试品溶液与对照品溶液 A 、B 各 100µl 注入液相色谱仪。

供试品溶液与对照品溶液 A 、B 图谱中，粒细胞巨噬细胞刺激因子主峰的保留时间应一致，约为 22 分钟。

对照品溶液 B 图谱中，主峰与人或牛血清白蛋白峰的分离度应不小于 2，重复进样（不少于 4 次）所得主峰峰面积的 RSD 应不大于 1.5%。

按面积归一化法只计算保留时间为 5～30 分钟的相关蛋白峰面积，单个相关蛋白峰面积应大不于总面积的 1.5%，所有相关蛋白峰面积应不大于总面积的4.0%。

备注：在该品种原液检定项下，3.1.4 纯度之后增加 3.1.5 相关蛋白项（具体内容见上文：注射用重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子原液中相关蛋白检测）， 后续检测项目编号依次递增。

时间（分钟） A （%） B （%） 0 64 36 30 44 56 35 0 100 45 0 100 50
64 36 60 64 36。