《PCR法支原体检测试剂盒》选购注意事项
（2016年10月16日）
目前，PCR法支原体检测仍然是支原体快速检测领域被客户选购最多的方法。

目前，商业化的PCR法支原体检测方法就有好几种，各优缺点分述如下：
●方法（1）：不带内参基因的普通PCR法支原体检测试剂盒。

该试剂盒含
有2条引物，不带内参基因。

通过30-35轮的普通PCR直接检测。

需要通过琼脂糖电泳分析检测结果，整个检测过程耗时3-4小时。

缺点：无法区分真阴性样品和由于细胞代谢产物抑制导致的假阴性样品（二者，支原体特异条带均为阴性）。

●方法（2）：带内参基因的普通PCR法支原体检测试剂盒。

该试剂盒含有
2条引物，带内参基因。

通过30-35轮的普通PCR直接检测。

需要通过琼脂糖电泳分析检测结果，整个检测过程耗时3-4小时。

优点：可以区分真阴性样品（内参条带为阳性而支原体特异条带为阴性）和由于细胞代谢产物抑制导致的假阴性样品（内参条带和支原体特异条带均为阴性）。

●方法（3）：巢式PCR法支原体检测试剂盒。

该试剂盒含有4条引物，一
般不带内参基因。

第一轮，用2条外引物通过30轮的PCR扩增后；第二轮，取少量第一轮的扩增产物作为模板，用2条内引物再进行30轮的PCR 扩增。

需要通过琼脂糖电泳分析检测结果，整个检测过程耗时6-8小时。

缺点：耗时太久，容易产生假阳性。

●方法（4）：定量PCR法支原体检测试剂盒。

该试剂盒含有2条引物，不
带内参基因。

通过40轮的定量PCR检测。

无需通过琼脂糖电泳分析检测结果，整个检测过程耗时2-3小时。

缺点：无法区分真阴性样品和由于细胞代谢产物抑制导致的假阴性样品（二者，均显示为没有扩增）。

由于PCR法支原体检测过程中，PCR的扩增可能会被细胞的代谢产物抑制的问题，是该方法的致命弱点。

Sigma公司的LookOut Mycoplasma PCR Detection Kit（货号MP0035）的PCR法支原体检测试剂盒说明书中也特别提到了这点，说明这是一个PCR法支原体检测中经常遇到的问题，其强烈建议用试剂盒进行DNA提取后再进行鉴定。

上述4种PCR支原体检测方法中，只有方法（2）可以区分真阴性样品（内参条带为阳性而支原体特异条带为阴性）和由于细胞代谢产物抑制导致的假阴性样品（内参条带和支原体特异条带均为阴性）。

所以，大家选购各公司的PCR法支原体检测试剂盒时，尽量选取含内参基因的上述方法（2）类的支原体检测试剂盒，比如上海易色的《PCR法支原体检测试剂盒》（货号：PM008）和Sigma公司的LookOut Mycoplasma PCR Detection Kit（货号：MP0035）。