微小ＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）是近年发现的一种高度 保守性、时序性单链非编码小分子ＲＮＡ。由１９～ ２３个核苷酸组成，大部分由基因的内含子部位产 生，能通过与对应的靶ｍＲＮＡ ３’端非翻译区（３’ ＵＴＲ）特异性结合破坏其稳定性，形成非对称ＲＩＳＣ 复合物，从而抑制靶ｍＲＮＡ翻译，对基因进行转录 后水平的调控。最近研究发现，ｍｉＲＮＡ在血小板 高度表达，并参与调控血小板功能，因此在心脑血 管疾病的发生发展过程中起着重要作用。
３．３
ｍｉＲＮＡ与血小板囊泡相关膜蛋白一８ 囊泡相关膜蛋白一８（ＶＡＭＰ一８）是一种血小板内
涵体的囊泡可溶性黏附蛋白受体，参与血小板脱颗 粒。ＶＡＭＰ一８基因编码了血小板致密核颗粒分泌 所必需的囊泡锚定蛋白，是血小板激活必不可少的 物质。Ｗａｎｇ等［１２］研究ＶＡＭＰ－８基因敲除 （ＶＡＭＰ一８√一）大鼠模型发现，ＶＡＭＰ一８基因缺陷 的血小板在致密颗粒、Ｑ颗粒和溶酶体释放的动力 学上存在明显的缺陷，５一ＨＴ分泌也明显被破坏，这 证明ＶＡＭＰ一８对血小板活化、胞质内炎症介质和促 凝物质的释放起着重要的调节作用。 Ｌｅｗｉｓ等［１３］对ＶＡＭＰ－８区域的标记和假设有 功能的ＳＮＰｓ进行分析发现，ＶＡＭＰ一８多态性 ｒｓｌ０１０在ＶＡＭＰ一８基因转录调控的３’ＵＴＲｌｌｌ
作用。Ｋａｎｎａｎ等［１５１在血小板内检测了５２种与凋 亡相关的ｍｉＲＮＡ，发现ｍｉＲ－１６、ｍｉＲ－１５０、－１５１、一 １５２、一１８４、－１８８、－１９６ａ、一１９７和一２０２表达明显升高， 而ｌｅｔ－７ａ、－７ｃ、－７ｅ、－７ｆ、一７９和一７ｉ ｍｉＲＮＡ在血小板内 几乎检测不到。其中ｍｉＲ－１６表达水平升高，可能 通过抑制Ｂｃｌ－２蛋白表达，促发血小板细胞凋亡形 成。其他ｍｉＲＮＡ的表达介于两者之间水平。 ５展望 ｍｉＲＮＡｓ是后基因组时代的前沿科学课题，已 逐渐被认识是人体内重要的基因表达调控者。非 正常的表达可以成为致病因素，也能为各种疾病治 疗提供新的视角。虽然目前对血小板内ｍｉＲＮＡ具 体分子机制还不很清楚，但随着研究的不断深入， 必将更加全面、准确地了解这种复杂的基因调控网 络。作为新的特异性基因调节小分子，ｍｉＲＮＡ不 仅有助于阐明血小板激活病理生理过程及相关疾 病的发病机制，而且会为缺血性心脑血管疾病的发 病机制及临床防治提供新的策略或靶标。
［６］Ｍｅｒｋｅｒｏｖａ Ｍ，Ｂｅｌｉｃｋｏｖａ Ｍ・Ｂｒｕｃｈｏｖａ Ｈ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ
ｓｉｏｎ ｏｆ ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｅｌｌ
ｌｉｎｅａｇｅｓ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｊ
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［７］
Ｂａｎｄｉｅｒａ Ｓ，Ｈａｔｅｍ
３．１
是血小板聚集和血栓形成的一个关键因子，是各种 血小板激活剂产生激活信号的最后转导通路，已成 为抗血小板治疗的靶标［１…。Ｍｕｌｌｅｒ等【１１Ｊ通过克隆 携带有在３’端ＵＴＲ结合了ｌｅｔ一７ａ靶序列的整合素 印质粒，发现ｌｅｔ一７ａ能抑制整合素口３基因的表达， 导入ｌｅｔ一７ａ反义ｍｉＲＮＡ可以升高整合素Ｂ３基因的 表达。如果通过ｌｅｔ－７ａ可以抑制或降低糖蛋白Ⅲａ 的表达。从而阻断血小板聚集的最后通路，则可能 成为预防血栓形成的一个新手段。
２２７０．
ＩＩ
ａ
ｉｎ
ｐｌａｔｅｌｅｔｓ［Ｊ］．Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，２００７，４７（１２）：２２６０－
［９］Ｌａｎｄｒｙ Ｐ，Ｐｌａｎｔｅ Ｉ，Ｏｕｅｌｌｅｔ
ｃｒｏＲＮＡ
ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ
ＤＬ，ｅｔ
ａ１．Ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ ｏｆ
ａ
ｍｉ—
ａｎｕｃｌｅａｔｅ
ｐｌａｔｅｌｅｔｓ［Ｊ］．Ｎａｔ
Ｓｔｒｕｃｔ
‘２７１’
不十分明确，认为其主要作用机制为：ｍｉＲＮＡ通 过ＲＩＳＣ与靶基因ｍＲＮＡ的３’端ＵＴＲ区互补结 合，在动物中则多数是通过两者的不完全互补结 合，抑制靶基因ｔｕＲＮＡ的翻译，进而影响靶基因 蛋白的表达［７］。整合素Ｂ３等蛋白质的合成，其编码 基因也是以ｍＲＮＡ的形式存在于血小板内部，其 转录过程和蛋白表达调控与ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ调控存在 着密切相关¨］。在血小板黏附、聚集、激活过程中， 有许多重要受体蛋白和黏附蛋白参与其中，大量研 究证实，ｍｉＲＮＡ可能作用于这些黏附、受体蛋白相 应的ｍＲＮＡ，参与基因表达调控，对血小板活化调 节起着重要作用。
ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ
１
不同的是，ｍｉＲＮＡ与靶ｍＲＮＡ的结合只需要５’端 的２～８个碱基与ｍＲＮＡ３’端互补配对［２］。大量研 究表明，ｍｉＲＮＡ通过激活相关基因调控而发挥作 用；但也有研究证实，ｍｉＲＮＡ通过抑制相关基因的 表达调控而发挥作用ｂ“］。
２
ｍｉＲＮＡ在血小板起源与表达 血小板从巨核细胞中脱落而来，血小板内部
及Ｐ２Ｙ１２ ｍＲＮＡ的３ ７端ＵＴＲ在ＨＥＫ２９３细胞中
区，含有ｍｉＲ一９６和ｍｉＲ一１５的假定结合位点，
ＶＡＭＰ一８ ｒｓｌ０１０多态性Ａ变异可能降低了茎环结
构的稳定性，增强ｍｉＲ一９６的结合，影响ｍＲＮＡ的 翻译。Ｋｏｎｄｋａｒ等［１４］对２８８名健康人血清进行血 小板聚集反应研究，根据血小板聚集率的高低将人 群分为高反应组和低反应组。通过检测不同组血 小板ＲＮＡ水平，结果发现，血小板反应性不同组间 血小板ｍＲＮＡ图谱存在明显差异，血小板高敏组人 群血小板内ＶＡＭＰ一８／ｖ—ＳＮＡＲＥ的ｍＲＮＡ水平明 显较高，是低反应组的４．８倍，ＶＡＭＰ一８蛋白是低 反应组２．５倍。研究还发现，ＶＡＭＰ一８单核苷酸多 态性与血小板反应性相关，并呈年龄依赖性。ｍｉＲ一 ９６存在于血小板内，并可能与ＶＡＭＰ－８
Ｍｏｌ
ＢｉｏＩ，２００９，１６（９）；９６１—９６６．
［ｉ０３
Ｄｏｂｒｚｙｃｋｉ Ｓ，Ｋｒａｌｉｓｚ Ｐ，Ｎｏｗａｋ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｔｒａｎｓｆｅｒ ｗｉｔｈ ＧＰⅡ ｂ／ｍ
ａ
ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｔｉｔｏｆｉｂａｎ ｆｏｒ ｐｒｉｍａｒｙ
ＶＳ．ｏｎ－ｓｉｔｅ
ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｃｏｒｏｎａｒｙ
ｍＲＮＡ ３’～
高表达，突变型ｍｉＲ一２２３基因水平明显升高后，突 变型Ｐ２Ｙ１２ｍＲＮＡ的水平也明显升高，提示ｍｉＲ一 ２２３可能调控血小板内Ｐ２Ｙ１２ｍＲＮＡ的表达。研 究还证实，ｍｉＲ－２２３可能通过效应蛋白Ａ９０２－ ｍｉＲ一２２３复合物调节Ｐ２Ｙ１２的表达。其中 Ｐ２Ｙ１２ｍＲＮＡ的３’端ＵＴＲ被预测至少还可以成为 ４种ｍｉＲＮＡ作用的靶点（包括ｌｅｔ－７ｉ、ｍｉＲ－２１、ｍｉＲ－ ２２１和ｌｅｔ一７９），ｍｉＲＮＡｓ通过这些作用靶点调节 Ｐ２Ｙ１２的表达，从而影响血小板的激活聚集功能。
ｍｉＲＮＡ的起源及表达过程，则是从巨核细胞胞质中 就已存在的ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ开始，经过Ｄｉｃｅｒ酶，ＴＲＢＰ２ 酶，Ａ９０２酶等加工过程形成成熟的ｍｉＲＮＡ，并最终形 成ｍｉＲＩＳＣ发挥抑制作用。血小板在巨核细胞ｍｉＲ－ ＮＡ的形成过程与其他的有核细胞一致，仍然保留了 巨核细胞遗留下来的少量ｐｒｅ－ｍｉ－ＲＮＡ，可以进行蛋 白质生物合成，而血小板来源于巨核细胞，其具有巨 核细胞胞质的相关结构与功能，但Ｄｒｏｓｈａ酶和辅助 因子ＤＧＣＲ８在血小板中检测不到，这决定了血小板 的无核特性。正因如此，ｍｉＲＮＡ在血小板内的起源 与表达机制过程非常值得探讨。 Ｅｄｅｌｓｔｅｉｎ等口］通过微阵列芯片数据库在１９名 志愿者中发现，血小板内存在７５０种ｍｉＲＮＡ，其中 ｍｉＲ－１５０、ｍｉＲ－１５５、ｍｉＲ一１２６和ｍｉＲ－１４６ａ的含量最 为丰富。Ｍｅｒｋｅｒｏｖａ等№３通过ｑＲＴ－ＰＣＲ检测技术 发现，在外周造血细胞系中含有不相同的ｍｉＲＮＡ的 表达，并检测了在各个外周造血细胞系中ｍｉＲＮＡ 表达情况。结果发现，在所有外周血细胞系中， ｍｉＲ－１６和ｍｉＲ－１４２－３ｐ高表达；ｍｉＲ一４５１在网织红 细胞中表达调控最高，而在血小板、粒细胞及单核 细胞中ｍｉＲ一２２３表达最高，Ｂ淋巴细胞和Ｔ淋巴细 胞中ｍｉＲ一１５０表达最高。
ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ
ｃｏｍｐｌｅｘ，ＲＩＳＣ）中，其中一条成熟的单链
ｍｉＲＮＡ保留在这一复合体中发挥作用，成熟的 ｍｉＲＮＡ通过碱基配对结合到与其互补的ｍＲＮＡ 的位点，实现调控基因表达。如果两者的结合是不 完全互补配对，对ｍＲＮＡ的翻译起抑制作用，最 后，ｍＲＮＡ因失去稳定性而降解。与ｓｉＲＮＡ作用
３．２
非编码区结合，ｍｉＲ－９６过表达可呈剂量依赖性引起
ＶＡＭＰ＿８ ｍＲＮＡ及蛋白水平下降，提示ｍｉＲ一９６对 于ＶＡＭＰ一８ ｍＲＮＡ可能起降解作用，从而可降低
ｍｉＲＮＡ与血小板整合素受体 ｍｉＲＮＡ与血小板整合素受体在血栓形成过程
中，整合素６３（糖蛋白Ⅱｂ／Ⅲａ）起着极其重要的作 用。整合素ｐ３与其配体结合，经“由内到外”的信号 激活后，向胞内传递细胞增殖、迁移或生存信号，与 纤维蛋白原的亲和力显着增加，引起血小板聚集，
ｂｐ
ｍｉＲＮＡ与黏附受体激动剂
血小板活化后，分泌出一系列黏附受体激动 剂，如：二磷酸腺苷（ＡＤＰ），５一羟色胺（５一ＨＴ）等。血 小板上的ＡＤＰ受体主要有２类：Ｐ２Ｙ１和Ｐ２Ｙ１２， 两者均为Ｇ蛋白配体受体。虽然Ｐ２Ｙ１２受体介导 的反应较弱，但在胶原诱导的血小板初始活化调节 过程中却起着至关重要的作用。Ｐ２Ｙ１２则与蛋白 配体Ｇｉ起协同作用，是维持血小板聚集和血栓稳定 的枢纽。Ｐ２Ｙ１２受体是血小板内部ｍＲＮＡ水平表 达最多的Ｐ２系列受体，其通过ｍｉＲＩＳＣ中的成熟 ｍｉＲＮＡ与ｍＲＮＡ的３’端非翻译区（ＵＴＲ）不完全 性结合，进而影响靶基因蛋白受体的表达。Ｌａｎｄｒｙ 等［９１通过在ＨＥＫ２９３细胞中导入携带报告基因的 共表达ｍｉＲ－２２３和Ｐ２Ｙ１２表达的基因，研究ｍｉＲ－ ２２３对Ｐ２Ｙ１２基因表达调控的影响发现，ｍｉＲ一２２３
Ｅ，Ｌｙｏｎｎｅｔ
ｔｏ
Ｓ，ｅｔ ａ１．ｍｉｅｒｏＲＮＡｓ
ｉｎ
ｄｉｓｅａｓｅｓ：ｆｒｏｍ ｃａｎｄｉｄａｔｅ ２０１０，７７（４）：３０６－３１３．
ｍｏｄｉｆｉｅｒ
ｇｅｎｅｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ