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实验一 显微镜的使用及微生物形态的观察


3、霉菌可产生复合分枝的菌丝体,分基内菌丝
和气生菌丝,气生菌丝生长到一定阶段分化产 生繁殖菌丝,由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝 体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别 不同种类霉菌的重要依据。
毛霉与根霉
青霉
分生孢子梗
分生孢子
小梗 梗基 附枝
曲霉
顶囊 分生孢子梗
分生孢子 次生小梗 初生小梗
(5)油镜观察
①用粗调节器将镜筒提起约2㎝,将油镜转至正下方。
②在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油,切勿加多。 ③从侧面注视,用粗调节器将镜筒小心地降下,使油 镜浸在香柏油中,其镜头几乎与标本相接,应特别 注意不能压在标本上,更不可用力过猛,否则不仅 压碎玻片,也会损坏镜头。 ④标本观察完毕后,转动粗调节器将镜筒升起,取下 标本玻片。立即用擦镜纸将镜头上的香柏油擦净, 然后用擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上残留的油迹, 最后再用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。
足细胞
四、器材
显微镜、细菌三型涂片、霉菌
和放线菌的永久玻片等。
五、操作步骤
(1)置显微镜于平稳的实验台上,镜座距实验台边沿约 3-4 ㎝,镜检者姿势要端正,一般用左眼观察,右眼便于绘图 或记录,两眼必须同时睁开,以减少疲劳,亦可练习左右 眼均能观察。
(2)调节光源、光线较强的天然光源宜用平面镜;光线较 弱的天然光源或人工光源宜用凹面镜。
(4)高倍镜观察将高倍镜转源自正下方,在转换物镜时,需用眼睛在侧面 观察,避免镜头与玻片相撞。如果高倍镜触及载玻片应
立即停止旋动,说明原来低倍镜就没有调准焦距,目的
物并没找到,要用低倍镜重调,如果调对了,换高倍镜 时基本可以看到目的物,若有点模糊,用细调节器调就 清晰可见。找到最适宜观察的部位后,将此部位移至视 野中心,准备用油镜观察。
转换器(nosepiece):为两个金属碟所合成的一个转盘, 其上装 3 - 4个物镜 , 可使每个物镜通过镜筒与目镜构成 一个放大系统。 载物台(stage):又称镜台,为方形或圆形的盘,用以载 放被检物体,中心有一个通光孔。在载物台上有的装有 两个金属压夹称标本夹,用以固定标本;有的装有标本 推动器,将标本固定后,能向前后左右推动。有的推动 器上还有刻度,能确定标本的位置,便于找到变换的视 野。 调焦装置:是调节物镜和标本间距离的机件,有粗动螺旋 (coarse adjustment)即粗调节器和微动螺旋(fine adjustment)即细调节器,利用它们使镜筒或镜台上下移动, 当物体在物镜和目镜焦点上时,则得到清晰的图像。

六、思考题和作业题
1、使用油镜观察时,为什么要在载玻片上滴加 香柏油? 2、镜检玻片标本时,为什么要先用低倍物镜观
察,而不是直接用高倍物镜或油镜观察?
3、绘制青霉和根霉图
显微镜是由机械装置和光学系统两大部分组成。
1.机械装置
镜座(base)和镜臂(arm) 镜座位于显微镜底部 , 呈马蹄形,它支持全镜。镜 臂有固定式和活动式两种,活动式的镜臂可改变角 度。镜臂支持镜筒。 镜筒(body tube) 是由金属制成的圆筒,上接目镜,下接转换器。镜 筒有单筒和双筒两种,单筒又可分为直立式和后倾 式两种。而双筒则都是倾斜式的,倾斜式镜筒倾斜 45°。双筒中的一个目镜有屈光度调节装置,以备 在两眼视力不同的情况下调节使用。
聚光器(condenser):光源射出的光线通过聚光器汇聚成光锥照射 标本,增强明度和造成适宜的光锥角度,提高物镜的分辨力。聚 光器由聚光镜和虹彩光圈(iris diaphragm)组成,聚光镜由透镜 组成。虹彩光圈由簿金属片组成,中心形成圆孔,推动把手可随 意调整透进光的强弱。调节聚光镜的高度和虹彩光圈的大小,可 得到适当的光照和清晰的图像。 光源(light source):较新式的显微镜其光源通常是安装在显微镜的 镜座内,通过按扭开关来控制;老式的显微镜大多是采用附着在 镜臂上的反光镜,反光镜是一个两面镜子,一面是平面,另一面 是凹面。在使用低倍和高倍镜观察时,用平面反光镜;使用油镜 或光线弱时可用凹面反光镜。 滤光片(filter):可见光是各种颜色的光组成的,不同颜色的光线波 长不同。如只需某一波长的光线时,就要用滤光片。选用适当的 滤光片,可以提高分辨力,增加影像的反差和清晰度。滤光片有 紫、青、蓝、绿、黄、橙、红等各种颜色的,分别透过不同波长 的可见光,可根据标本本身的颜色,在聚光器下加相应的滤光片。
2.光学系统 物镜(objective):安装在镜筒下端的转换器上,因接近 被观察的物体,故又称接物镜。其作用是将物体作第一 次放大,是决定成像质量和分辨能力的重要部件。物镜 上通常标有数值孔径、放大倍数、镜筒长度、焦距等主 要参数。如10×/0.25 ;160/0.17 ,其中 “10 ×”表示放 大倍数,“0.25” 表示数值孔径(numerical aperture), “160/0.17”分别表示镜筒长度和所需盖玻片厚度 (m m)。 目镜(coular lens):装于镜筒上端,由两块透镜组成。目 镜把物镜造成的像再次放大,不增加分辨力,上面一般 标有4×、10×、16×等放大倍数,可根据需要选用。一 般可按与物镜放大倍数的乘积为物镜数值孔径的 500-700 倍,最大也不能超过 1000 倍的选择。目镜的放大倍数过 大,反而影响观察效果。
三、基本原理 1、细菌的个体形态是指细菌细胞的大小, 形状等特征,利用观察个体形态对细菌 进行初步识别和鉴定。
2、放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类
革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝体, 紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌 丝,基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气
生菌丝,并进一步分化产生孢子丝及孢子。
(6)观察后的处理工作

擦完后,把物镜转离光轴,把反光镜转到与载 物台垂直的方向,以减少灰尘粘落上面,而后 罩上镜套,小心的放回镜箱内,保存备用。 注意:微生物标本片,多用涂片法制成,观察 完毕,不能用力擦去玻片上的镜油,只能用擦 镜纸轻轻压吸或滴一滴二甲苯用擦镜纸轻拉。 示教片看完处理后应放回原处。
(3)低倍镜观察
检查的标本需先用低倍镜观察,因为低倍镜视野较大, 易发现目标和确定检查的位置。
将三型涂片玻片标本置镜台上,用标本夹夹住,移动推 动器,使观察对象处在物镜正下方,转动粗调节器,物 镜降至距标本约0.5cm处,由目镜观察,此时可适当地 缩小光圈,否则视野中只见光亮一片,难见到目的物, 同时用粗调节器慢慢升起镜筒,直至物像出现后再用细 调节器调节到物像清楚时为止,然后移动标本,认真观 察标本各部位,找到合适的目的物,并将其移至视野中 心,准备用高倍镜观察。
实验一 显微镜的使用及微生物形态的观察
一、目的要求
1.熟悉普通光学显微镜的构造及各部分的功能; 2.学习并掌握油镜的原理和使用方法; 3.学习观察微生物的个体形态; 4.学会生物图的绘制。
二、显微镜的基本构造
1. 物镜转换器 2. 接物镜 3.游标卡尺 4.载物台 5.聚光器 6. 彩虹光阑 7.光源 8. 镜座 9. 电源开关 10. 光源滑动变阻器 11. 粗调螺旋 12. 微调螺旋 13. 镜臂 14.镜筒 15.目镜 16.标本移动螺旋
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