第四章核酸分离纯化
一、学习目标
掌握 DNA和RNA分离纯化的步骤、原则和常用方法。

熟悉常见临床分子生物学检验标本的种类、标本处理的一般原则。

二、重点和难点内容
（一）临床分子生物学检验标本的主要种类：
血液标本（全血、血清、血浆、外周血单个核细胞）、分泌物标本（鼻咽分泌物、生殖道分泌物、唾液、痰液、胃液等）、组织标本等。

（二）临床分子生物学检验标本的主要处理原则：
（1）适时、适量采集标本。

（2）低温运送与保存。

（三）核酸分离纯化的步骤：
（1）制备细胞及破碎细胞。

（2）消化蛋白质，去除与核酸结合的蛋白质、多糖及脂类等生物大分子。

（3）去除其它不需要的核酸分子。

（4）沉淀核酸，去除盐类、有机溶剂等杂质。

（四）核酸分离纯化的原则：
（1）维持完整度（抑制DNA酶或RNA酶对DNA或RNA 的降解活性）。

（2）确保高纯度。

（五）分离纯化后的理想DNA样品应具备的条件：
（1）不含对后续检测所用酶（如后续PCR检测所用酶：DNA聚合酶）的活性有抑制作用的有机溶剂和高浓度的金属离子。

（2）最大程度上避免蛋白质、多糖和脂类的污染。

（3）排除RNA分子的污染与干扰。

（六）核酸分离纯化的方法：
（1）基因组DNA 的分离纯化
酚抽提法
吸附柱法（原理：基于高盐缓冲系统下，DNA与硅基质的可逆结合来分离纯化DNA）
磁珠法（原理：基于磁珠表面修饰的对DNA有吸附作用的官能基团，通过其与DNA的可逆结合、磁场对磁珠的作用来分离纯化DNA）
（2）总RNA的分离纯化
Trizol (异硫氰酸胍&苯酚混合液)法
总RNA提取试剂盒(吸附柱法&磁珠法)
（3）mRNA的分离纯化
寡聚(dT)-纤维素柱层析法
寡聚(dT)-微珠法
寡聚(U)-琼脂糖柱层析法
原理：基于mRNA3’末端poly(A)尾结构，依据A与T 或A与U的碱基互补配对原则，来分离纯化mRNA。