实验步骤
2.探针的制备 1.FISH 样 本 的 制备 3.探针标记
4.样本的预处理
6.染色体显带 5.杂交 7.荧光显微镜检 测8.结果分析Fra bibliotek实验步骤
1.FISH 样 本 的 制备 2.探针的制备 3.探针标记
4.样本的预处理
5.杂交 6.染色体显带
7.荧光显微镜检测
具体实例.
THANKS
原位杂交与免疫组化
MEDICAL REPORT
PART 01 免疫组化的概念
主要内容
一、免疫组化 二、原位杂交
PART 02 免疫组化的步骤 PART 03 免疫组化的应用 PART 04 原位杂交
一、免疫组化
原理
抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组 织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的 某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，
的二抗
免疫组化应用
在科研中的应用
在科研中的应用
在科研研究某个基因与疾病的发生 （肿 瘤）临床分期，预后，患者生存率等的相 关性。最终的目的是考察这个基因的临床 意义。
二、原位杂交
基本原理
分类 荧光原位杂交类型
原位杂交
探针
实验步骤 实验流程
具体实例
基本原理
1.核酸分子杂交的基本原理是利用核酸分
免疫组化的概念
通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去
探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与 抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化 学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以其达 到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定 量的研究。
1.染色方法
免疫组化的步骤
2.石蜡组织切片的制备 3.免疫组化染色（石蜡切片）
年中总结报告 BUSINESS REPORT
次抗体，其二抗为未标记桥抗体。
石蜡组织切片的制备
1.取材：从动物或者患者取下组织材料。
2.固定：将所需的材料进行固定，使得组织内蛋白质
迅速凝固液（甲醛）细胞内结构和成分不再发生改变。 3. 脱水：固定后的组织内进行脱水，以 便石蜡的浸入。脱水用梯度酒精进行脱 水（自动脱水机） 4.浸蜡与包埋：组织放置刚过熔点的石蜡中，然后进行包埋，将透明后浸了 蜡的组织块放到盛有熔化石蜡的模块中，并使之凝固成蜡块。（包埋机）
子（DNA，RNA）的碱基对形成氢键的互
补性（A=T,A=U,C=G），用一标记的2.核 算探针去检测与之碱基互补的靶核酸
免疫学中抗原—抗体的反应
分类
1.组织
2.细胞
3.染色体
荧光原位杂交类型
1.基因组原位杂交
2.荧光原位杂交
3.多色荧光原位杂交
探针
基因探针，即核酸探针，是一段带有检测 标记，且顺序已知的，与目的基因互补的 核酸序列(DNA或RNA)。基因探针通过分 子杂交与目的基因结合，产生杂交信号， 能从浩瀚的基因组中把目的基因显示出来 。根据杂交原理，作为探针的核酸序列至 少必须具备以下两个条件：①应是单链， 若为双链，必须先行变性处理。②应带有 容易被检测的标记。它可以包括整个基因 ，也可以仅仅是基因的一部分；可以是 DNA本身，也可以是由之转录而来的RNA
染色方法
1.直接法 用标记物（荧光素、霉素）直接标记在
EARLY GOAL
2.间接法 荧光素，霉标记在二抗 上（二抗：抗产生一抗 动物的LgG抗体）。
一抗上，标记抗体与抗原结合。再通过 显色或者荧光激发后在显微镜下观察 4.ABC法 （亲和素—生物素—过 3.非标记Ab桥法 氧化物霉复合法）等等
桥法是霉标记抗体的改进，经过三
5.切片与贴片：(组织切片机) （1）切片 （2）展片 （3）贴片
免疫组化染色(石蜡切片)
5.封闭 1. 考 片 65 摄 氏 度 1-2h 2. 常规二甲笨脱 蜡，和梯度酒精 水化 3.灭活内源性过
氧化物酶
4.抗原修复
6.一抗过夜
8.显色
10. 常 规 梯 度 酒 精 脱水，透明，干燥，
封片。
7. 加 入 有 标 记 9.苏木素复染