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促肾上腺皮质激素(ACTH)作业指导书
定校间隔:每批不同试剂须重新进行定标(例如在试剂盒被分析仪识别后的24小时内)。除此之外,以下情况必须重新进行定标:
Elecsys2010、E170和cobas e分析仪:
同一批号的试剂盒在分析仪上使用超过1个月(28天)。
同一试剂盒在分析仪上使用超过7天
对于所有分析仪上均需定标:
根据需要:如质控数据超过额定的限度。
3.试剂、校准品、质控品和其他所需材料
采用罗氏原装配套试剂。
试剂:
M:链酶亲和素包被的微粒(透明瓶盖)每瓶6.5ml。链酶亲和素包被的微粒:0.72mg/ml; 结合力:470ng生物素/mg微粒;微粒经过防腐处理。
R1:生物素化抗ACTH抗体(灰色瓶盖)每瓶8 ml;生物素化单克隆抗ACTH抗体(鼠):0.3 mg/L;MESb缓冲液:50 mmol/L,PH值6.2;经过防腐处理。
所有分析仪均需要的材料:
货号11298500, Elecsys SysClean, 5 x 100 mL系统清洗液
4.仪器和校准
使用仪器:瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪
仪器校准:
溯源性:本测定方法已按照标准人造ACTH产品标准化。
每批Elecsys ACTH 试剂盒上都有条形码记录各批号试剂特定的定标信息。预先确定的主曲线适用于用Elecsys ACTH CalSet试剂盒进行测定的分析仪。
5.操作步骤(以E 170为例)
5.1校准操作步骤:
在编缉各项目的参数时,已经在Application—Calib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时,只需在定标菜单Calibration中进行即可。3.2进入Calibration—Status菜单,用鼠标选择需定标的项目,再根据需要点单点定标(BLANK键)或两点定标(TWO POINT键)、跨距定标(SPAN键)、多点定标(FULL键),再选择其它项目进行相应选择,最后点SAVE,将定标物放入在Calibration—Calibrator中定义好的位置,点Start,再点Start,仪器开始定标。
标本要求
只有按如下方法收集的标本才适合用本试剂盒检测。
K3-EDTA、K2-EDTA血浆;收集于硅化管或塑料管,非硅化管将导致测量值减低;
只能使用预先冷冻的标本小瓶。注入血液标本后,立即将小瓶放置在冰上。使用冷却离心机分离血浆。立即测定标本或冷冻在-20℃下保存;
稳定性: 22°C可保存2小时;在-20°C可保存4周,只可冻溶一次14;
R2:钌复合物标记的抗ACTH抗体(黑色瓶盖)每瓶8ml;钌复合物标记的抗ACTH单克隆抗体(鼠):0.3 mg/L;MES缓冲液:50 mmol/L,PH值6.2;经过防腐处理。
b)MES=2-吗啉乙磺酸
校准品:
货号03255760, Elecsys ACTH CalSet, for 4 x 1 mL
货号11706799, Elecsys 2010分吸吸头, 30 x 120 移液管吸头
Modular Analytics E170免疫分析仪所需材料:
货号04880340, ProCell M, 1 x 2 L系统缓冲液
货号04880293, CleanCell M, 1 x 2 L检测池洗液
货号03023141, PC/CC杯, 50杯用于在测定前预热Procell M及Cleancell M。
质控品:
货号04655346, Elecsys PreciControl ACTH 2 x3mL,各含PreciControl Universal 1和2
其他所需材料:
Elecsys2010,e411分析仪所需材料:
货号11662988, Elecsys ProCell, 6 x 380 mL,系统缓冲液
1.分析原理
采用双抗体夹心法原理,整个过程18分钟完成。
·第1步:50µl标本、生物素抗ACTH特异性单克隆抗体和钌(Ru)标记ACTH特异性单克隆抗体混匀,形成夹心复合物。
·第2步:加入链霉亲和素包被的微粒,让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。
·第3步:将反应液吸入检测池中,检测池中的微粒通过电磁作用吸附在电极表面。未结合的物质通过ProCell除去。在电极上加以一定的电压,使复合体化学发光,用光电倍增器检测发光的强度。通过检测仪的定标曲线得到最后的检测结果,定标曲线是通过2点定标点和试剂条形码上获得的主曲线生成的。
不是所有能获得的厂商的试管均可用于检测。不同厂商标本收集系统可能含有不同材料,某些情况下会影响检测结果。在使用原始试管处理标本时,应遵循试管生产商所提供的指导。
如标本中有沉淀出现,必须先作离心处理再进行分析。已经加热失活的标本无法分析。使用叠氮化物作为稳定剂的标本或质控液无法分析。检测前,请确保患者标本、定标液及质控液放置在20–25°C的环境中。由于蒸发因素的影响,标本、定标液及质控液在放入分析仪后请在2小时内完成测定。
在Calibration—Status菜单中看定标结果,点Calibration Result键看定标结果,点Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线。
5.2样本检测程序:
单个样本输入,在主菜单下选择Workplace- Testslection,在Sequence No栏输入标本号,然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目,点SAVE键,样本号自动累加。
货号11662970, Elecsys CleanCell, 6 x 380 mL,检测池洗液
货号11930346, Elecsys SysWash, 1 x 500 mL附加洗液
货号11933159,SysClean 适配器
货号11706802, Elecsys 2010分析杯,60 x 60反应管
货号03005712,ProbeWash M, 12 x 70 mL清洗液,用于在检测完毕后或更换试剂时清洗系统。
货号12102137,分析杯/分析吸头组合装 M, 48分析杯x 84反应管或加液器吸头,废物袋
货号03023150, WasteLiner,废物袋
货号03027651, SysClean适配器M