一、实验目的
掌握制作石蜡切片中取材、包埋的基本操作技术。

二、实验用品
1、实验材料：鱼
2、实验试剂：10%甲醛溶液（40%甲醛10ml，蒸馏水90ml）、50%酒精、70%酒精、80%酒精、90%酒精、95%酒精、100%酒精、二甲苯、石蜡。

3、实验器具：解剖器，双面刀片，小瓶，牛皮纸、电热恒温箱、脱水机、包埋机。

三、实验步骤
1、取材：用任何杀生的方法把鱼杀死，将腹腔打开，切取0.5cm3左右大小的肝脏、肠等组织。

2、固定：将切好的组织直接投入10%甲醛固定液中，固定24h。

3、脱水：50%酒精→70%酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精→100%酒精→100%酒精。

每级1-2h。

70%酒精处可长期保存。

4、透明：1/2二甲苯+1/2100%酒精(1-2h) →纯二甲苯(1h) →纯二甲苯(1h)
5、浸蜡：石蜡先置于60℃的温箱中，倒入含二甲苯及材料的小瓶中置于37℃温箱中，放置2-4小时。

6、包埋：先提升恒温箱的温度至60℃，换纯蜡3次，每次1-2h，用牛皮纸叠纸盒，置于45-60℃的烫板上，倒入材料，摆放好材料，把标签（正面向外置于底部），补足石蜡，倒好后轻轻的置于冷水盆中，注意底面要接触盆中凉水，待石蜡全部凝固后可取出晾干，也可在凉水盆中放置过夜。

四、作业
分析总结石蜡切片技术中固定和包埋的操作注意事项有哪些？
附：折纸盒按下列顺序折叠：
(1) 折AA'及BB'；
(2) 折CC'及DD'；
(3) 折CE'与AE'、向外夹出EE'。

同样折出FF'，GG'及HH'；
(4) 使CE'E与E'IE两三角形相叠，并沿E'C和EI重叠的折痕向后转折。

同样折其余三只角；
(5)折RIJF向外，同样折出GKLH，即折成所需的纸盒。

一、实验目的
掌握制作石蜡切片中切片、贴片的基本操作技术。

二、实验用品：
1．实验试剂：95%酒精、100%酒精、二甲苯、明胶液、蒸馏水。

2．实验器具：切片机、展片机、烤片机、载玻片、盖玻片、酒精灯、毛笔、牛皮纸、刀片、解剖刀、台木。

三、实验步骤：
1．修块、粘块、整修的步骤：
（1）选取所要切片的材料，从包埋的石蜡块上用单面刀片切割下来，注意不可损伤包埋的组织。

（2）确定切面的方位，用刀片将石蜡块的四面作初步的整修。

保证材料四周都有石蜡包围。

但不可太多。

切面的上、下边平行。

（3）点燃酒精灯，并准备一把旧的解剖刀。

（4）左手大拇指与食指间持整修好的石蜡块，材料向上用其余三指夹住台木。

此时将解剖刀在酒精灯上加温后，即放在台木与石蜡块之间，因解剖刀已加温，遇上两面的石蜡都会融化，可立即将解剖刀抽出，石蜡块迅速压在台木上。

（5）再将解剖刀蘸取少许石蜡碎屑，放在刚才固定的石蜡四周。

此时，解剖刀再加温，并迅速将石蜡块四周的碎屑烫平。

使石蜡块牢固地粘在台木上。

（6）修石蜡块上下面平行，使切成的蜡带呈一直线，不弯曲。

每个切片中组织的距离接近。

2．切片的方法：
（1）准备下列用具：毛笔、牛皮纸
（2）将已固着和整修好的石蜡块和台木装在切片机的夹物部分.
（3）安装切片刀，将刀片夹在刀夹上，并调整好刀的角度。

刀的斜度，非常重要，最好先切除的蜡块试刀，以确定刀的斜度，一经调度适合后，就不要随便变动，以免每次试刀的麻烦。

（4）移动刀片固定器，使夹刀部与夹物部之间的距离调整好，以石蜡块的表面刚贴近刀口为度，在旋紧切片固定器的螺旋。

（5）调整石蜡块与刀口之间的角度与位置。

修整蜡块，将刀片移近蜡块，使小蜡块的下边与刀锋平行，如不平行，可调夹物部上的螺旋。

然后把它固定，再转下蜡块．呈矩形才行。

只有平整的蜡块，才能切出平整的蜡带。

（6）最后根据需要，调整控制切片厚度的机制。

调度后，把它固定下来。

上述四步骤完成后，就可进行切片，
（7）开始切片。

右手握旋转轮的手柄，摇动一转就可切下一片，切下的蜡片粘在刀口上，待第二片切下时粘在一起，所以连续摇动就可将切下的蜡片连成一条蜡带。

这时左手就可持毛笔将蜡带提起，边摇边移动蜡带。

转速为每分钟40-50为宜。

（8）切成的蜡带到20-30厘米时，即以右手用另一只毛笔轻轻将蜡带挑起，平放在牛皮
纸上。

靠刀的一面较光滑，应向下，较皱的一面向上。

（9）切下的蜡片是否良好，此时应先行检查。

（10）切片工作结束后，仍将刀片用具擦拭干净。

3．贴片：贴附牢固，在染色时不易脱落；使皱褶的蜡片伸展平整。

用具：载玻片、粘片剂、解剖刀、蒸馏水、展片机及烤片机。

材料切成薄片后，须将切片粘在玻璃片上，加热展开，这叫粘片。

所用载玻片必须清洁才能使用。

粘片时，需把胶液置簿玻片上，再取切片，浮置胶液上，然后置烘片台上，使切片展开烫平，材料不现皱纹为度。

最后将切片依次排好，用滤纸吸去多余水分，同时以记号笔在玻片上编号，放入温箱中烘干，温度30～40℃约1小时即干。

（1）将展片机温度调整到35℃，保持恒定。

（2）在载玻片上涂蛋白甘油粘片剂。

其法是用细玻璃棒蘸取一小滴粘片剂，加在载玻片的中央，然后用洗净的手指（无名指）加以涂抹，范围不要太广，也不要太多，以能贴足够的蜡片为度。

（3）将涂粘片剂的载玻片放在展片机上，滴加蒸馏水数滴，此时若发现水不均匀分散而聚成滴状，即表示玻片不清洁，有残留油脂等物在上面。

（4）用解剖刀将蜡带切成小段，每段的长度应以盖玻片的长度为准，一般应比盖玻片短约1/5-2/5。

分片应从蜡带交界处分。

将蜡带轻轻移到涂有水的载玻片上，蜡片光面应向下贴在载玻片上，依次排列整齐。

留出右端贴标签处。

（5）材料展平后，从展片机上取下，稍稍倾斜留出多余的水分，用吸水纸吸干背面及周围多余水分，放于烤片机（35℃）上烤干水分。

保存在玻片盒内。

四、作业
分析总结石蜡切片技术中切片和贴片的操作注意事项有哪些？
实验三石蜡切片技术——染色、观察
一、实验目的
掌握制作石蜡切片中苏木精——伊红（HE）染色法及其结果的观察。

二、实验用品
1、实验试剂：二甲苯、酒精、苏木精染液、伊红染液、树胶。

苏木精原液配方：苏木精（2g），冰醋酸（10ml），甘油（100ml），95%酒精（100ml），蒸馏水（100ml），硫酸铝钾（5g），配制步骤：1.将苏木精溶于少量酒精中，加冰醋酸后搅拌，加速其溶解；2.加入甘油及其余酒精；3.研碎钾矾，溶于水中并加温；4.将加温的钾矾溶液一滴滴地加入染色剂中，并不断搅动；5.瓶口用双层纱布包扎，放于通风处，并经常摇动，直到颜色变为紫红时即可使用，成熟时间约需2-4周以致数月之久，若加0.2g碘酸钠即可立即成熟。

已成熟的原液，须用瓶塞密封，置低温暗处长期保存。

使用时以原液1份加入50%酒精与冰醋酸等量混合液1份或2份。

伊红溶液配方：伊红（1g）、70-75%酒精（100ml）。

配制步骤：先将伊红用蒸馏水(少许)调成浆糊状，再加入酒精，边加边搅拌，直到彻底溶解，此时试剂有些混浊，取少许冰醋酸，加入到试剂中去，试剂逐渐转变为清亮，呈鲜红色，。

2、实验器具：染缸、显微镜。

三、实验步骤
1、二甲苯脱蜡：把烤好的载玻片放于盛二甲苯的染缸中纯二甲苯(5-10min) →纯二甲苯(5-10min)
2、二甲苯与纯酒精等量混合液2min。

3、纯酒精、95%、70%、50%、30%酒精各2min。

4、蒸馏水2min。

5、苏木精染液15-20min。

6、蒸馏水洗，去除多余染液。

7、1%酸酒精分化数秒钟（如染色合适，此步可取消）
8、自来水洗数秒至1min。

9、氨水中“蓝化”数秒，或在自来水中冲洗使变蓝。

10、蒸馏水15min。

11、伊红染色2min。

12、70%酒精数秒钟。

13、95%酒精。

纯酒精各2min，片子取出时需速拭净，但注意勿触及切片。

14、纯酒精与二甲苯等量混合液2min。

15、二甲苯2min。

16、树胶封藏。

17、观察结果：细胞核呈蓝色；细胞质呈粉红色。

四、作业
分析总结脱蜡及染色过程中的注意事项有哪些？。