离子交换柱层析的操作与应用
(2)湿法装柱 将吸附剂加入合适量的色谱最初用洗脱剂调成稀糊 状,先把放好棉花、砂子的色谱柱下口打开,然后 徐徐将制好的糊浆灌人柱子。注意,整个操作要慢, 不要将气泡压人吸附剂中,而且要始终保持吸附剂 上有溶剂,切勿流干,最后让吸附剂自然下沉。当 洗脱剂刚好覆盖吸附剂平面时,关紧下口活塞。
三、吸附柱层析的基本操作与应用
第四节 离子交换柱层析
• 一、原理与特点
离子交换层析是依据各种离子或离子化合物与离子交换剂 的结合力不同而进行分离纯化的。离子交换层析的固定相 是离子交换剂,它是由一类不溶于水的惰性高分子聚合物
基质通过一定的化学反应共价结合上某种电荷基团形成的。
电荷基团与高分子聚合物共价结合,形成一个带电的可进行 离子交换的基团。平衡离子是结合于电荷基团上的相反离子, 它能与溶液中其他的离子基团发生可逆的交换反应。平衡离 子带正电的离子交换剂能与带正电的离子基团发生交换作用, 称为阳离子交换剂;平衡离子带负电的离子交换剂与带负电 的离子基团发生交换作用,称为阴离子交换剂。
(三)依分离机理分 1.吸附层析 2.分配层析 3.凝胶过滤 4.离子交换层析 5.亲和层析 6.疏水层析
第二节 层析分离的基本操作技术
一、柱层析基本操作技术 (一)柱层析的基本装置 1、固定相 2、流动相 3、收集系统 4、检测系统 5、蠕动泵
(二)柱层析系统的基本操作技术
1.装柱 2.平衡 3.加样 4.洗脱 5.流速控制 6.分部收集 7.洗脱峰检测、合并收集 8.层析介质的再生
• 一、吸附层析的原理与特点 基本原理同吸附薄层色谱法。 • 二、吸附剂的选择 • 常用的吸附剂除氧化铝、硅胶和聚酞胺外, 还有活性炭。 • 吸附剂的种类很多,而对吸附剂的选择尚 无固定的法则,一般需通过小样实验来确 定。
三、吸附柱层析的基本操作与应用
(1)干法装柱
装 柱
在柱下端加少许棉花或玻璃棉,再轻轻地撒上一层 干净的砂粒,打开下口,然后将吸附剂经漏斗缓缓 加入柱中,同时轻轻敲动色谱柱,使吸附剂松紧一 致,最后,将色谱柱用最初洗脱剂小心沿壁加入, 至刚好覆盖吸附剂顶部平面,关紧下口活塞。
二、离子交换层析剂的种类
(一)离子交换剂的基质 (二)离子交换剂的电荷基团 根据与基质共价结合的电荷基团的性质,可以将离子交换 剂分为阳离子交换剂和阴离子交换剂。 (三)交换容量 交换容量是指离子交换剂能提供交换离子的量,它反映离 子交换剂与溶液中离子进行交换的能力。通常所说的离子 交换剂的交换容量是指离子交换剂所能提供交换离子的总 量,又称为总交换容量,它只和离子交换剂本身的性质有 关。
上 样
三、吸附柱层析的基本操作与应用
在装好吸附剂的色谱柱中缓缓加入洗脱剂,进行梯 度洗脱,各组分先后被洗出。若用50g吸附剂,一般 每份洗脱液量常为50rnLo但若所用洗脱剂极性较大 或各成分的结构很近似时,每份的收集量要小。
洗 脱
整个操作过程必须注意不使吸附柱表面的溶液流干, 即吸附柱上端要保持一层溶剂。此外,应控制洗脱 液的流速,流速不应太快。着流速过快,柱中交换 来不及达到平衡,因而影响分离效果。
(1)湿法上样 把被分离的物质溶在少量色谱最初 用的洗脱剂中,小心加在吸附剂上层好与吸附剂上表面一致时,在上面撒一层细砂,关 紧柱活塞口。
(2)干法上样 多数情况下,被分离物质难溶于最 初使用的洗脱剂,这时可选用一种对其溶解度大而 且沸点低的溶剂,取尽可能少的溶剂将其溶解。在 溶液中加入少量吸附剂,拌匀,挥干溶剂,研磨使 之成松散均匀的粉末,轻轻撒在色谱柱吸附剂上面, 再撒一层细砂。
固定相(凝胶)是一种不带电荷的具有三维空间的多孔网状 结构的物质,凝胶的每个颗粒的细微结构就如一个筛子,小 的分子可以进入凝胶网孔,而大的分子则排阻于凝胶颗粒之 外,因而具分子筛的性质。又因整个层析过程一般不变换洗 脱液,好像过滤一样,故也称凝胶过滤。
二、纸层析基本操作技术
• • • • (一)滤纸 (二)展开剂 (三)操作方法 (四)在抗生素中的应用
三、薄层层析基本操作技术
(一)基本原理 (二)吸附剂和展开剂的选择 (三)基本操作 1.薄层板的制备 2.样品的预处理 3.点样、展层与显色 4.影响Rf的主要因素 5.薄层色谱法的应用
第三节 吸附柱层
(三)层析的基本概念
• • • • • • 1.固定相 2.流动相 3.分配系数及迁移率(或比移值) 4.分辨率(或分离度) 5.正相色谱与反相色谱 6.操作容量(或交换容量)
二、层析分离技术的分类
(一)依操作形式分 分为纸层析、薄层层析和柱层析。
(二)依流动相分 根据流动相的形式分类,层析可以分为液相层析和气 相层析。
第七章 层析分离技术
第一节 层析的基本原理与分类
• 一、层析分离的基本原理与特点 • (一)基本原理 • 层析分离是一种物理的分离方法,利用多 组分混合物中各组分物理化学性质的差别, 使各组分以不同的程度分布在两个相中。
• (二)层析分离具有如下基本特点 • 优点:(l)分离效率高。 • (2)应用范围广。 • (3)选择性强。 • (4)设备简单,操作方便。 • 缺点:处理量小、操作周期长、不能连续 操作,因此主要用于实验室,工业生产上 还应用较少。
(四)离子交换剂的选择、处理和保存 1、离子交换剂的选择 取决于被分离的物质在其稳定的pH值下所 带的电荷,离子交换层析柱的分辨率和流 速也都与所用的离子交换剂颗粒大小有关。 2、离子交换剂的处理和保存 处理:干粉状的离子交换剂首先要进行膨 化,再用酸碱分别浸泡 3、离子交换树脂的选择依据
三、离子交换柱层析的操作与应用
(一)离子交换柱层析的操作 1.层析柱 2.平衡缓冲液 3.上样 4.洗脱缓冲液 5.洗脱速度 6.样品的浓缩、脱盐 (二)离子交换柱层析的应用 1.水处理 2.分离纯化小分子物质 3.分离纯化生物大分子物质
第五节 凝胶柱层析
一、凝胶层析的原理
凝胶层析又称分子排阻层析、分子筛层析或凝胶过 滤。它是指混合物随流动相经固定相(凝胶)的层 析柱时,混合物中各组分按其分子大小不同而被分 离的技术。