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篇一：细胞传代培养实验报告
细胞传代培养
一.实验目的
初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本
操作过程，为生物技术在医学上的
应用打下基础。
二、原理
从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生
长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。
细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察
活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与
体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细
胞作为研究对象，耗费少，比较经济，
因此成为生物学研究的重要手段。
细胞培养可分为原代培养和传代（继代）培养。
直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为
原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散
后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传
代培养的累积次数就是细胞的代数。
细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。
所有离体细胞的生长都受
温度、渗透压、ph值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操
作是细胞培养成败的关键。
三、材料和试剂
1、细胞:293细胞株
2、试剂：0.25%胰酶、1640培养基（含10%小牛血清）
3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、电动枪，培养板，吸液枪，5ml玻璃吸管、酒精
灯等
四、操作步骤
1、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。
2、加入1〜2m10.25%胰酶溶液，使板底细胞都浸入溶液中。
3、马上吸走胰酶液，再次加入2ml左右的胰酶，同样马上吸去，再加入几滴胰酶放入培养箱中消化几分钟
4、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液，再按照观察的生长情况确定的传代比例传代
5.根据确定的比例来取需要的量(剩余的细胞拿来做细胞计数)，加入4ml左右的培养液
6.前后左右的来回震荡使细胞分散均匀后，将培养板放入培养箱
7.收拾整理超净台
附：消化液配制方法：
称取2.5克胰酶蛋白酶，加入100m110xpbs+纯水溶解到1L,滤器过滤除菌，4℃保存，
用前可在37℃下回温。
10xpbs 配方：
na2hpo4(14.2g)Kh2po4(2.32g)nac1(80g)Kc1(2.02g) (调至ph=7.4)
五、实验结果
传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上，2 天左右就在瓶内形成单层，
达到七八成满。
这时需再次传代
六、讨论与反思
无菌操作中的注意事项
在无菌操作中，一定要保持工作区的无菌清洁。
为此，在操作前要认真地洗手并用75%乙醇消毒。
操作前20〜30 分钟起动超净台灭菌。
培养瓶要在超净台内才能打开瓶塞，打开之前和加塞前瓶口都要在酒精灯上烧一下，打开瓶口后的操作全部都要在超净台内完成。
操作完毕后，加上瓶塞，才能拿到超净台外。
使用的吸管在从消毒的铁筒中取出后要手拿末端，将尖端在火上烧一下，戴上胶皮乳头，然后再去吸取液体。
总之，在整个无菌操作过程中都应该在酒精灯的周围进行。
每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。
多做，熟能生巧
篇二：细胞传代实验报告
篇一：细胞传代培养实验报告
细胞传代培养
一.实验目的
初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程，为生物技术在医学上的应用打下基础。
二、原理
从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在
人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。
细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较经济，因此成为生物学研究的重要手段。
细胞培养可分为原代培养和传代（继代）培养。
直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。
细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。
所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、ph值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。
三、材料和试剂
1、细胞:293细胞株
2、试剂：0.25%胰酶、1640培养基（含10%小牛血清）
3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、电动枪，培养板，吸液枪，5ml玻璃吸管、酒精灯等
四、操作步骤
1、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。
2、加入1〜2m10.25%胰酶溶液，使板底细胞都浸入溶液中。
3、马上吸走胰酶液，再次加入2ml左右的胰酶，同样马上吸去，再加入几滴胰酶放入培养箱中消化几分钟
4、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液，再按照观察的生长情况确定的传代比例传代
5.根据确定的比例来取需要的量(剩余的细胞拿来做细胞计数)，加入4ml左右的培养液
6.前后左右的来回震荡使细胞分散均匀后，将培养板放入培养箱
7.收拾整理超净台
附：消化液配制方法：
称取2.5克胰酶蛋白酶，加入100m110xpbs+纯水溶解到11,滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。
10xpbs 配方：
na2hpo4(14.2g)kh2po4(2.32g)nac1(80g)kc1(2.02g) (调至ph=7.4)
五、实验结果
传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上，2 天左右就在瓶内形成单层，达到七八成满。
这时需再次传代
六、讨论与反思
无菌操作中的注意事项
在无菌操作中，一定要保持工作区的无菌清洁。
为此，在操作前要认真地洗手并用75%乙醇消毒。
操作前20〜30 分钟起动超净台灭菌。
培养瓶要在超净台内才能打开瓶塞，打开之前和
加塞前瓶口都要在酒精灯上烧一下，打开瓶口后的操作全部都要在超净台内完成。
操作完毕后，加上瓶塞，才能拿到超净台外。
使用的吸管在从消毒的铁筒中取出后要手拿末端，将尖端在火上烧一下，戴上胶皮乳头，然后再去吸取液体。
总之，在整个无菌操作过程中都应该在酒精灯的周围进行。
每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。
多做，熟能生巧篇二：细胞生物学实验传代培养
一、【实验目的】
1、了解动物细胞传代培养的基本原理。
2、掌握动物细胞传代培养的基本操作，并对hela细胞进行传代培养。
二、【实验原理】
hela 是 heiettalacks 的简称，heiettalacks 是一位患有子宫颈癌的美国妇女的名字，在她死后，该细胞走被广泛散发到各研究机构，并无限次地繁殖分裂下去。
培养细胞的特性：
贴附生长：必须贴附于支持物表面才能生长。
见于各种实体瘤细胞。
悬浮生长：于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物表面。
见于各种造血系统肿瘤细胞。
每代贴附生长细胞的生长过程：
1、游离期细胞接种后在培养液中呈悬浮状态.也称悬浮期。
此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。
10分钟一 4小时
2、贴壁期细胞附着于底物上，游离期结束。
细胞株平均在10分钟一 4小时贴壁。
3、血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白和纤粘素、胶原（:动物细胞传代培养实验报告）等糖蛋白（生长基质），这些带正电荷的糖蛋白的促贴壁因子先吸附于底物上，悬浮细胞再与吸附有促贴壁因子的附着。
4、潜伏期此时细胞有生长话动，而无细胞分裂。
细胞株潜伏期一般为6〜24小时。
5、对数生长期细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究。
6、停止期（平台期）细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂
细胞传代方法
1、悬浮生长细胞传代
离心法传代：离心（1000转/分）去上清，沉淀物加新培
养液后再混匀传代。
直接传代法：悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除1/2 — 2/3,用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。
2.悬浮生长细胞传代（hela细胞）
此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接吹打法使纫胞从瓶壁脱落下来，进行传代。
3、贴壁生长细胞传代
采用酶消化法传代。
常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。
细胞培养用液的配制
1、d-hanks原液试剂配方
氯化钠80.0g磷酸氢二钠（nahpo - 2ho） 0.6g氯化钾4.0g磷酸二氢钾0.6g三蒸水1000ml
2、d-hanks工作液试剂配方
d-hanks原液100ml三蒸水896m10.5%酚红液4ml
3、消化液：
胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽健，除去细胞间粘蛋白及糖蛋白，影响细胞骨架，从而使细胞分离。
胰蛋白酶液浓度越高，作用越强，但超过一定限度会损伤细胞。
胰蛋
白酶是一种黄白色粉末，用无ca2+、mg2+的pbs缓冲液。