以测Re、Rg1为例1 色谱条件的选择1.1采用C18（4.6mm×250mm，5um）1.2流动相乙腈(A) - 水(B)，20:801.3流速1.0mL/min1.4波长的选择（203nm）以人参皂苷对照溶液在200 ~ 300nm 范围进行光谱扫描测定, 结果人参皂苷在nm 波长处有最大特征吸收, 选择nm作为人参皂苷的测定波长。

1.5温度301.6进样量10ul2 溶液制备2.1对照品溶液的制备精密称取干燥的人参皂苷Re对照品5.790mg 人参皂苷Rg1对照品6.325mg，置于50mL的容量瓶中，加入甲醇进行溶解并稀释至刻度，摇匀，后静置，即得对照品溶液( 其中含有人参皂苷Rg10.1235mg/mL，人参皂苷Re0.1028mg/mL)。

2.2 供试品溶液的制备取样品2g，至于具塞锥形瓶中，加甲醇5ml,超声10min,离心15min，转速为2500r/min，取上清液过滤，甲醇定容至5ml。

加5ml水饱和正丁醇萃取两次，合并正丁醇液，蒸干，残渣用甲醇定容至5ml。

2.3 阴性样品溶液的制备取缺少人参的其他药材，制成缺少人参的阴性样品，再按照2.2项下的步骤制成阴性样品溶液。

3 系统适应性试验取对照品溶液供试品溶液阴性对照品溶液按照1项下的色谱条件，分别将3种溶液以10ul进样，测定分离度,均应≥1.5，色谱峰对称性，理论塔板数，说明空白对照样品的测定无干扰性。

4 线性关系考察分别精密取2.2项下的供试品溶液1、2、4、6、8、10、12 uL，按照1项下的色谱条件进样测定，以峰面积( Y) 对浓度( X) 进行线性回归，回归方程分别为( r=) 结果表明人参皂苷在g范围内线性关系良好。

5 精密度考察取2.1项下方法制备的对照品溶液10.0u L，在1色谱条件下依法重复进样6次，记录其峰面积，结果表明峰面积的RSD为%，表明其精密度良好。

6 稳定性考察取同一批供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24、36、48h，精密吸取溶液10 uL，注入高效液相色谱仪中，按照1项下进行测定，记录色谱峰面积结果峰面积的RSD为%，表明样品溶液在48h内基本稳定。

7 重复性考察取同一批号的样品溶液，按照上述2.2项下方法得供试品溶液5份，按照含量测定法，分别精密吸取10u L，按照1色谱条件，测定峰面积，结果峰面积的RSD为%，表明该含量测定方法重复性良好。

8 回收率试验精密吸取5份已知含量的样品20mL置于50mL的容量瓶中，各瓶中分别精密加入标准混合的储备液5.0、5.0 、7.0 、7.0 、9.0、9.0mL，加流动相稀释至刻度照1项下的色谱条件进行测定，平均加样回收率为%，RSD 为%。

9 样品含量测定取3批样品，按照2.2项下方法配制成供试品溶液，精密吸取10u L溶液，按照1色谱条件进行测定，同时按照外标一点法进行计算3批供试品的含量测定。

组分色谱柱流动相流速温度1 Rb1Rb2RcRdReRg1F1 F2Rg3Rh1Rh2C-KPPD 250mm*4.6mm，5um水（A）—乙氰（B）0(77%）→13(77%）→ 33(56%）→38(32%）→45(32%）→55(0%）60(0%）→ 63(77%）1.0ml/min252 Rg1 Re 250mm*4.6mm，5um 二元梯度洗脱，需两个高压泵0.1mol/LKH2PO4（A），为乙腈∶水=75∶25，PH=3.5（B）1.0ml/min383 Rg1 200mm*4.6mm，5um 乙腈- 水 ( 20 : 80 ) 1.0ml/min室温4 Rg1 、Re 、R f、Rg 2 、Rb1 、Rc、Rb2、Rb3、Rd 150mm*4.6mm，5um乙腈( A) - 水(B)0(18% )→ 24(22%)→ 26(26%)→30(32%)→50(33.5%)→55(38%)1.0ml/min355 Rg1 Rb1 250mm*4.6mm，5um 乙腈( A) - 水(B)10(81% )→35(81-71%)→50(71%)1.2ml/min306 Rg1 150mm*4.6mm，5um 乙腈- 水 ( 25 : 75 ) 1.0ml/min307 Rg1 Rb1 250mm*4.6mm，5um 乙腈- 0.05%磷酸水溶液(18：82) 1.0ml/min308 Rg1Re Rb1 150mm*4.6mm，5um乙腈( A) - 水(B)0(19% )→35(19-28%)→50(28%)→60(28—29%)→75(29%)0.7ml/min259 Re 乙腈 - 0.05 m o l /L 磷酸二氢钾溶液( 19.5 : 80.5 ) 1.0ml/min2510 Rb1 250mm*4.6mm，5um 乙腈-0.015%磷酸溶液（31∶69） 1.0ml/min组分对照品制备供试品制备线性关系1 Re10ul Re0.3mg/ml取1.5g ,水饱和正丁醇100ml ,称定重量, 加热回流1小时,补足减失的重量, 滤过, 弃去初滤液, 取续滤液5 0 ml用正丁醇饱和的氨试液洗涤4次( 50 , 50 , 40 , 30m l ) , 弃去氨液, 正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤2 次( 50 , 40m l ) , 弃去水洗液, 正丁醇液置水浴上蒸干,甲醇定容至10ml用微孔滤膜( 0.4 5 mm ) 滤过R e对照品溶液4 、8 、1 2 、16 、20ul2 Rb110ul Rb10.4mg/ml0.9 g，甲醇50 ml，称定重量，超声处理30 min，用甲醇补足减少的重量，过滤，取续滤液20 ml，65 ℃水浴蒸干，残余物用40 ml水饱和正丁醇分次溶解，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20 ml，保留正丁醇液；合并二次水液，用水饱和的正丁醇萃取2次，分别为20 ml、15 ml，弃去水液；合并前后的正丁醇液，65 ℃减压浓缩至干。

残余物加甲醇10 ml定容用0.45 mm微孔滤膜滤过。

Rb1对照品溶液10、20、50 ul稀释10倍10、20 ul3 Rg110ul Rg10.225mg/ml20 g , 甲醇100 mL , 回流1 h ,滤过, 用甲醇洗残渣3 次, 合并滤液, 蒸干。

残渣加水40 mL溶解, 乙醚萃取 2 次, 每次40 mL , 水饱和正丁醇萃取2次,每次40 mL , 合并正丁醇层, 氨试液洗 2 次, 每次40 mL , 正丁醇层蒸干溶剂,残渣加水10 mL 溶解移至D 101 大孔吸附树脂柱(内径1 . 5 c m, 长12 c m, 经2 , 4 , 6 ,8, 10 ,12 ,14ul过 4 % 氢氧化钠溶液前处理)以水50 mL 洗脱, 弃去水液, 再用40 % 乙醇30 mL 洗脱, 弃去洗脱液, 用70 % 乙醇洗脱, 收集洗脱液, 蒸干, 甲醇1 0 mL 定容4 Rg1Re10ul Rg10.1235mg/mlRe0.1028mg/ml精密取3批样品各20mL，分别置于25mL的容量瓶中，加入流动相稀释至刻度，静置后即得供试品溶液各10 ul510ul Rg1Rb1Rg10.2mg/ml，Rb10.2mg/ml3g精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50mL,称定,超声30min,再称定,用甲醇补足减失质量,摇匀,滤过,取续滤液15mL,蒸干,残渣用甲醇分多次溶解,转移置10mL量瓶中，加甲醇至刻度2，4，10，16，18,20u l610ul Rg1ReRb10.2400.2100.205mg/ml10g,置索氏提取器中，加三氯甲烷乙醚( 3∶1) 溶液100mL加热回流30min脱脂，弃去溶剂，药渣挥干溶剂，转移至100mL锥形瓶中，精密加水饱和正丁醇50mL，密塞，放置过夜，超声处理30min，滤过，精密量取续滤液25mL，至蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇定容至5mL，滤过2、4、6、8、10 ul72 0μL Rg1ReRfRg2Rb1Rc、Rb2、Rb3、Rd约1g →滤纸包好→置索氏提取器中→加适量乙醚→加热回流4h →弃去乙醚液→药渣挥去乙醚→加甲醇适量→加热回流10 h →置蒸发皿中→蒸干甲醇→加色谱甲醇溶解→定容到10mL，用0.45 μm微孔滤膜过滤1、凝胶处理：A：样品0.5g，流动相稀释定容至25ml，取5ml离心5min，转速为4000r/min，上清液过滤。

B：样品0.5g，流动相稀释定容至50ml，过滤。

C：样品5g，水稀释定容至10ml。

D：样品3g，乙醇稀释定容至50ml，过滤，取滤液10ml 用50%乙醇定容至25ml。

E：样品0.5g，加甲醇超声10min，定容至50ml，0.45um 微孔滤膜过滤。

F：样品3g，甲醇稀释定容至100ml，过滤,取滤液1ml，甲醇定容至10ml。

G：样品2.5g，甲醇稀释定容至5ml。

2、流动相：乙腈(A) - 水(B)Rg1(A%):20 25 Rb1(A%):30 Re(A%):20Rd(A%):35 Rb3(A%):30 Rc(A%):30出柱顺序：Rg1 Re Rh1 Rb1 Rc F1 Rb2 Rd F2 Rg3 C-K Rh2 PPD3、分离度：R=2(tR2-tR1)/(W1+W2）tR:保留时间，进样到出现最大峰值的时间W :色谱峰基线宽度R越大，表明相邻两组分分离越好。

一般说当R＜1时，两峰有部分重叠；当R=1.0时，分离度可达98%；当R=1.5时，分离度可达99.7%。

通常用R=1.5作为相邻两组分已完全分离的标志。

R≥1.5称为完全分离。

《中国药典》规定R 应大于1.5。

理论塔板数：N=（tR/σ）2=16(tR)2/W =5.54(tR/W1/2)2理论塔板数越高，柱子的柱效越好。