试管架、离心机、记号笔、显微镜。
试剂: 生理盐水。
标本:
抗凝或非抗凝静脉血。
操
作
1、全血2ml 1000g离心5min，吸取分离上清至另一干净试 管（备用）； 2、压积加生理盐水约2～3ml，充分摇匀或吸管轻轻吹打 混匀，再次离心去掉上清液； 3、重复离心（1000g，60s）洗涤红细胞3次，去掉上清液 制备压积红细胞； 4、取1滴压积红细胞于1支干净的小试管中，在其中加入 19滴生理盐水，用小吸管轻轻吹打混匀，就是5%的红细 胞悬液。
作业
简述导致ＡＢＯ血型鉴定出现正反
定型不一致的常见原因。
器材 小试管、滴管、试管架、记号笔、鉴定纸 板、显微镜、离心机。 试剂 1.Rh抗血清：常用的为IgM抗抗D（其他为抗C、 抗c、抗E、抗e）。 2.己知Rh阳性和阴性的5％红细胞悬液各1份 3.生理盐水。 标本 静脉血。
操作(盐水试管测试法)
1.取单克隆抗-D（IgM）-C、-c、-E、-e试剂各

正定型
反定型
注意事项
1.试剂 5.冷抗体 2.悬红 3.蛋白 4.溶血 7.污染 6.老年、儿童
三 、 Rh血型鉴定

目的 原理ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
掌握Rh血型鉴定的原理、方法。 Rh血型系统，包括四十几个抗原，通常使用相应
的抗C、抗c、抗D、抗E、抗e五种Rh分型血清来检查红
细胞抗原。 在临床输血中一般只做D抗原的鉴定，被检红细胞 和抗D血清凝集者为Rh阳性，不凝集者为Rh阴性。
实验一ABO血型 鉴定和Rh血型鉴定
临床检验诊断学实验室
实
验
内
容
一、5%红细胞悬液的配制 二、ABO血型鉴定（试管法、纸片法） 三、Rh血型鉴定
?
一、5%红细胞悬液的配制
原理：使用一定量的稀释液（生理盐水）稀释
压积红细胞，遵循抗原抗体结合的量比关系，
获出最佳结果。
器材: 小试管（玻璃及塑料皆可）、加样枪、
1滴到5支试管中。
2.每管各加1滴3％～5％待检红细胞悬液。 3.充分混匀，以1000 g离心15秒。 4.观察结果：轻摇散开试管底部的细胞扣，用 肉眼观看凝集。 5.判定结果
注意事项
1．用抗D血清进行Rh血型鉴别时，结果为阴性，不能直 接报告Rh阴性，需进一步检测弱D型还是部分D型。 2．Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体 凝集反应块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻摇动 试管，不可用力振摇。 3.Rh血型系统的抗体多为后天免疫刺激产生，不需要做 反定型。
试管法结果判定
判断标准
表l ABO血型正反定型结果
受检血清+试剂红细胞 （反定型） Ac Bc Oc － ＋ ＋ － ＋ － ＋ － － － － － 试剂血清+受检红细胞 （正定型） -A -B 受检血型 ＋ － － ＋ － ＋ － ＋ A B O AB
操作：玻片法(鉴定纸板)

(1)洁净玻片(鉴定纸板)一张。标-A、-B，分别用滴管滴
试剂:
1. ABO血型抗体：抗A、抗B(-A、-B)；
2．试剂红细胞：3％～5％Ac、Bc及Oc。
3. 生理盐水。
标本:
抗凝或非抗凝静脉血。
操作（试管法） (1)标记试管：正定型：取洁净小试管2支，分别标 明－A、－B；反定型：取3支小试管，标记Ac、Bc、 Oc。 (2)配5%悬浮红细胞：取静脉血2滴于小试管中，加 2ml生理盐水，混匀，1000g离心60s，弃上清；重复3 次。取管底1滴压积加19滴生理盐水，即为5%悬红。 (3)加样：正定型管中分别加入1滴试剂和1滴悬红， 反定型管中分别加入2滴血清和1滴试剂红细胞。 （4）离心：1000g离心15秒。 (5)结果：轻摇试管,观察有无凝集或溶血现象。
二、ABO鉴定
目的：掌握ABO正反定型的原理、方法。 原理：红细胞凝集试验，通过正、反定型鉴定ABO 血型。 正定型：用已知血型特异性抗体（抗-A、抗-B） 来测定红细胞上有无相应的抗原； 反定型：用已知血型试剂红细胞测定血清中有无 相应的抗体。
器材:
记号笔、小玻璃试管、滴管、试管架、
离心机、鉴定纸板、显微镜。
加抗-A、抗-B试剂1滴，再加受检者10％红细胞悬液l滴， 混匀。

(2)另取洁净玻片(或鉴定纸板)一张。标Ac、Bc、Oc，各 (3)室温轻转动玻片(或鉴定纸板) ，使血清与细胞充分混 玻片试验时可用低倍镜观察结果。
加受检血清2滴，再分别滴加Ac、Bc、Oc悬红1滴。

匀，约2min肉眼观察凝集(溶血)反应。
红细胞凝集强度判断标准 4+ 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。 3+ 红细胞凝集成大小块，血清清晰。 2+ 红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰。 l+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。 ±镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离 红细胞。 mf 混合凝集外观（mixed field）指镜下可见少数红细 胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。 － 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。