青贮饲料发酵品质的评定方法
1微生物的测定
青贮饲料发酵过程中的微生物调查是在无菌工作台(Clean bench)内进行。
将贮藏瓶开封，称取中间部位的材料30 g，装人盛有270m1 0.85%灭菌生理盐水的塑料袋内，充分搅拌，将此溶液稀释10-109倍后，乳酸菌用BCP加标准琼脂培养基(BCP Plate count agar.)，乳酸杆菌用醋酸琼脂培养基(Acetate agar)，乳酸球菌用Lee氏琼脂培养基(Lee 's agar)，丝状菌和酵母菌用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(Potato dextrose agar)，一般细菌用普通琼脂培养基(Nutrient agar)，用平板培养法进行菌数计测。
各种微生物进行多次重复培养实验，计测单位表示为：每克试料中所含有的菌数。
分离用培养基
①乳酸菌——用BCP培养基：酵母膏2.5g,蛋白胨5g,葡萄糖5g,溴甲酚紫
0.04g,琼脂15g,蒸馏水1000ml,pH7.0;丁立孝.萝卜汁乳酸发酵菌种的分离与鉴定，莱阳农学院学报，18(3): 165~168,2001
②乳酸菌——MRS培养基(1000ml) ：蛋白胨10g, 牛肉膏10g, 酵母提取物5g, 磷酸氢二钾2g, 柠檬酸二铵2g, 乙酸钠5g, 葡萄糖20g, 吐温80 1ml, 七水硫酸镁0.58g, 四水硫酸锰0.25g, pH调至6.2~6.4,在115℃灭菌20min。
王小芬,崔宗均,胡跃高等，苜蓿青贮接种菌系Li6、Al2、Ru2的筛选及其发酵特性，草地学报。
Vol.12 No.2（2004）。
注吐温80 为一种消除泡沫的物质，常常在能产生气泡的反应中添加。
③乳酸杆菌——乳酸菌琼脂培养基：胰蛋白胨20.0g，NaCl 4.0g，酵母浸膏5.0g，醋酸钠1.5g，明胶2.5g,抗坏血酸0.5g，葡萄糖5.0g，乳糖5.0g，蔗糖5.0g，琼脂20.0g，蒸馏水1000ml，0.100MPa灭菌15min.
④乳酸杆菌——SL 琼脂培养基（Selective Lactobacilli agar）Rogose等1953——杨洁彬、凌代文、郭兴华等。
乳酸菌生物学基础及应用，中国轻工业出版社1996：北京
酪阮水解物（Trypticase）10 g
酵母提取物 5 g
柠檬酸二铵 2 g
COONa·3H2O 25 g
CH
3
MgSO
4·7H
2
O 0.58 g
MnSO
4·4H
2
O 0.15 g
葡萄糖 20 g 土温 80 1.0 ml
KH
2PO
4
6 g
FeSO
4·7H
2
O 0.03 g
琼脂 15 g
溶解琼脂在500毫升沸水中，溶解其他组分在500毫升水中，用冰醋酸调pH 至5.4，并混合已融化的琼脂，进一步煮沸5分钟，倾倒平板或将此热的培养基适量分装到灭菌的带螺口盖的瓶或试管内，这样无需进一步灭菌，避免重复融化和冷却。
⑤乳酸球菌——Lee氏琼脂培养基：胰蛋白胨10.0g，K
2HPO
4
0.5g，酵母浸膏
10.0g，乳糖5.0g，蔗糖5.0g，CaCO
3
3.0g，溴甲酚紫0.02g，琼脂20.0g，蒸馏
水1000ml，0.100MPa灭菌20min，CaCO
3
分开灭菌，混合后摇匀倒平板。
⑥丝状菌和酵母菌——马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）
⑦一般细菌——普通琼脂培养基
3.2.1.3 培养基
（1）乳酸菌发酵培养基
MRS 培养基：
（2）乳酸杆菌计数培养基
SL 琼脂培养基[39]（Selective Lactobacilli agar）Rogose等1953——杨洁彬、凌代文、郭兴华等。
乳酸菌生物学基础及应用，中国轻工业出版社1996：北京
酪阮水解物（Trypticase）10 g
酵母提取物 5 g
柠檬酸二铵 2 g
CH3COONa·3H2O 25 g
MgSO4·7H2O 0.58 g
MnSO4·4H2O 0.15 g
葡萄糖20 g
土温80 1.0 ml
KH2PO4 6 g
FeSO4·7H2O 0.03 g
琼脂15 g
溶解琼脂在500毫升沸水中，溶解其他组分在500毫升水中，用冰醋酸调pH至5.4，并混合已融化的琼脂，进一步煮沸5分钟，倾倒平板或将此热的培养基适量分装到灭菌的带螺口盖的瓶或试管内，这样无需进一步灭菌，避免重复融化和冷却。
（3）乳酸球菌计数培养基
Lee 氏琼脂培养基（Lee’s ager）[40]：胰蛋白胨10.0 g，K2HPO4 0.5 g，酵母浸膏10.0g，
乳糖5.0 g，蔗糖 5.0 g，CaCO3 3.0 g，溴甲酚紫0.02 g，琼脂20.0 g，蒸馏水
1000 mL，0.100 Mpa 灭菌20 min，CaCO3 分开灭菌，混合后摇匀倒平板。
（4）霉菌和酵母菌计数培养基（Potato dextrose ager）
马铃薯葡萄糖琼脂培养基[41]：马铃薯块200~300 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，
pH5.5~5.7，蒸馏水1000 mL
氨态氮的测定
用氧化镁蒸馏法
赵传孝等编著.食品检验技术手册[M].北京:中国食品出版社,1990:559~561.
夏玉宇等。
饲料分析检验。
北京，化学工业出版社，1994
霉菌、酵母菌用Sabouraud琼脂培养基：葡萄糖40g，蛋白胨l0g，琼脂I5g，蒸馏水1000ml 一般细菌用普通琼脂培养基：肉膏l0g，蛋白陈l0g，NaCl 5g，琼脂15g.，蒸馏水1 000ml
2分析方法
材料草及青贮饲料的化学组成用常法，明，水分含量用甲苯蒸馏法[[4]，可溶性碳水化合物用Anthrone法[,10:,.乳酸缓冲能由McDonald和Henderson法，青贮饲料的pH值用pH 电极测试表，有机酸含量用Flieg法，挥发性氮用水蒸汽蒸馏法，L(+)型乳酸和D(一)型乳酸的含量用F - kit酶分析法(药品来源;Boehringer Maner Mannheim Gmbh Biochemica, Germany)分别测定。