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制剂分析 外标法,内标法与混标法

书P83例7(内标法):本品每1g含樟脑164mg,P86例8(外标法),P86例9本品每1g含黄芪甲苷为0.2mg,供试品制备取样量为1g.(对数方程外标两点法)可参考P231-233,6个验证内容。

小儿热速清口服液中黄芩苷的含量测定(外标一点法):(1)对照品溶液的制备:取黄芩苷对照品约10mg,精密称定,置200ml量瓶中,加50%甲醇适量,置热水浴中振摇使溶解,放冷,加50%甲醇至刻度,摇匀,即得。

(实际浓度为0.0504mg/ml)(2)供试品溶液的制备:精密量取本品0.5ml,置D101大孔吸附树脂柱(内径约1.5cm,柱高10cm)上,用70ml水,以流量1.5ml/min洗涤,继续用40%乙醇洗脱,弃去7~9ml,收集续洗脱液,置50ml量瓶中,定容至刻度,摇匀,即得。

(3)标准曲线的绘制:精密吸取浓度为0.0504mg/ml的黄芩苷对照品溶液1.0ml,2.0ml,5.0ml,8.0ml,10.0ml,分别置10ml的量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀。

精密吸取上述对照液10ul注入液相色谱仪,记录峰面积。

以进样量X(ug/ml)对峰面积Y进行回归处理,得回归方程Y=25.540x-0.1061(r=1.0000),结果见表1,表明黄芩苷进样量5.04~50.4ug/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系,如图。

表1 黄芩苷对照品的线性关系考察进样量(ug/ml) 峰面积回归方程相关系数5.04 128.710.08 257.525.20 643.1 Y=25.540x-0.1061 r=1.0000 40.32 1029.650.40 1287.3(4)专属性试验:在与样品测定完全相同的条件下,分别精密吸取对照品溶液,供试品溶液及阴性对照液各10ul,进样分析,观察色谱图。

如图2,阴性无干扰,说明该实验方法的专属性较强。

(5)A为对照品溶液 B为阴性对照液 C为供试品溶液(6)精密度试验:精密吸取其浓度为25.20ug/ml的黄芩苷对照品溶液10ul。

重复进样6次,测得黄芩苷的峰面积积分值,详见表2。

表2 精密度试验结果峰面积均值 RSD643.1643.5642.9 643.1 0.11%641.7643.5644.2从上表可知进样6次黄芩苷峰面积的均值为643.1,RSD为0.11%(n=6),说明仪器的精密度良好。

(6)重复性试验:取同一批号的样品,分别按照(2)项下方法平行制备6份供试品,按样品含量测定方法测定,各精密吸取10ul进样,测得结果如表3所示。

表3 重复性试验结果序号样品中含量(mg/ml) 平均含量(mg/ml) RSD1 0.30472 0.31243 0.3015 0.3059 1.4%4 0.29975 0.30976 0.3074结果表明黄芩苷的平均含量为0.3059mg/ml,RSD为1.4%(n=6),表明方法重现性好。

(7)稳定性试验:取同一份供试品溶液,分别在制备后的0、2、4、6、8h进样10ul,测得各次峰面积。

结果如表4所示表4 稳定性实验结果时间(h)峰面积平均值 RSD0 257.52 257.34 257.0 257.5 0.15%6 258.18 257.8结果RSD为0.15%,表明供试品溶液在8h内稳定。

(8)加样回收率试验:精密量取该样品溶液0.25ml,置50ml容量瓶中,共6份,分别精密加入黄芩苷对照品溶液(浓度为0.0504mg/ml)1.5ml,按(2)项下供试品溶液的方法制备,在上述的色谱条件下进样10ul,测得峰面积,计算黄芩苷的回收率及RSD。

结果如表5所示。

表5 黄芩苷加样回收率实验结果取样量样品中含量加入量测得量回收率平均回收率 RSD (ml)(ug) (ug)(ug) (%) (%) (%) 0.25 75.12 149.76 98.70.25 75.53 148.83 99.50.25 74.97 75.6 147.93 96.5 97.8 1.20 0.25 75.76 147.87 95.40.25 76.12 150.23 98.00.25 75.07 147.83 96.2黄芩苷的6个加样回收率均在95%~105%范围内,平均回收率为97.8%,RSD为1.20%,表明方法的回收率良好,准确度较高,方法可行。

本品每1g含黄芪甲苷为0.2mg,供试品制备取样量为1g(外标二点法)对照品:精密称取黄芪甲苷对照品适量,加甲醇制成每1 mL含黄芪甲苷0.515 mg 的溶液,作为对照品溶液。

供试品:取样品1g,精密称定,置于10ml量瓶中,加甲醇至刻度,超声处理补重即得。

(1)线性与范围——线性关系考察精密吸取对照液1.0,2.0, 3.0, 4.0,5.0 mL,置100mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,各精密吸取10μL进样,测定峰面积积分值。

以峰面积积分值的对数为纵坐标(.Y),以黄芪甲苷进样量的常用对数为横坐标(X ),绘制标准曲线,计算得回归方程:Y=0.986 0X+ 5.5520,r= 1 ;黄芪甲苷在5.150~25.75μg 范围内进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。

进样量(ug/ml ) 进样量对数 峰面积对数 回归方程 相关系数 5.15 0.71 5.83 10.30 1.12 6.24 Y=0.986x+5.1320 r=1.0000 15.45 1.19 6.31 20.60 1.31 6.42 25.75 1.41 6.52y = 0.986x + 5.132R 2= 15.75.85.966.16.26.36.46.56.600.20.40.60.811.21.41.6浓度对数峰面积对数(2)专属性——专属性试验在相同条件下,分别精密吸取对照品溶液,供试品溶液及阴性对照液各10ul ,进样分析,色谱图如下,((A 对照品 B 阴性 C 样品))阴性无干扰,说明该实验方法的专属性较强。

(3)精密度精密量取对照品溶液10uL ,连续进样6次,测得峰面积积分值如下表由上表可知,RSD 为0.23%,表明仪器的精密度良好。

(4)重复性试验取同一批样品6份,平行制备供试品溶液, 按样品含量测定方法测定,各精密吸取10ul 进样,结果如下表 编号 含量(mg/g ) 平均含量/(mg/g ) RSD/% 1 0.0854 2 0.0850 3 0.0831 0.0853 1.30 4 0.0864 5 0.0858 6 0.0849上表可知,平均含量为0.0853mg/片,RSD 为1.30%,表明方法重现性好。

(5)稳定性试验取同一份供试品溶液,分别在制备后的0、2、4、6、8h 进样10ul ,测得各次峰面积,结果如下所示间隔时间/h 峰面积 峰面积的平均对数 RSD/% 0 219.8 2 216.5 4 220.6 2.34 1.01 6 223.2 8 218.5 结果RSD 为1.01%,表明供试品溶液在8h 内稳定。

(6)准确度——加样回收率试验取6份供试品各0.5g ,按100%比例加入待测成分纯品序号 峰面积 峰面积的平均对数 RSD/% 1 230.8 2 230.6 3 231.3 2.36 4 230.3 5 229.6 6 230.20.23序号 原有量(mg ) 加入量(mg) 测得量(mg) 加样回收率/% 平均值/% RSD/% 1 2 3 4 5 6 0.1001 0.1004 0.0996 0.1000 0.0999 0.09970.10000.2002 0.1996 0.2009 0.1998 0.2009 0.1999 100.1 99.2 101.3 99.8 101.0 100.2100.30.7试验结果表明,所建立的方法加样回收率较高,符合含量检测要求。

十滴水软胶囊中樟脑的含量测定(校正因子内标法)对照品溶液的制备:精密称取樟脑对照品500mg ,置25ml 量瓶中,加无水乙醇至刻度,摇匀。

(实际浓度20.0002mg/ml )供试品溶液的制备:取本品装量差异项下的内容物,混匀,取约0.8g ,精密称定,置具塞试管中,用无水乙醇真要提取5次,每次4ml ,分取乙醇提取液,转移至25ml 量瓶中,精密加入薄荷脑125mg ,加无水乙醇至刻度,摇匀,作为供试品溶液。

(1) 线性关系考察:精密吸取浓度为20.0002mg/ml 樟脑对照品溶液0.5、1.3、2.5、3.8、5ml ,精密加入薄荷脑50mg ,分别加无水乙醇稀释至10ml 。

精密吸取上述对照液1μl ,注入气相色谱仪,进1针。

以进样浓度X (μg/ml )对平均峰面积Y 进行回归处理,的回归方程。

结果如下表1所示:表1 线性关系考察结果(n=5)进样浓度X (μg/ml ) 峰面积 标准曲线 相关系数线性范围/μg/ml 1000.01 250.1 y = 0.2508x + 0.2892 r=1.0000 1000.01~10000.1 2600.026 652.35000.05 1257.4 7600.076 1904.6 10000.1 2508.7樟脑标准曲线y = 0.2508x + 0.2892R 2= 1050010001500200025003000020004000600080001000012000进样浓度(μg/ml)峰面积由上表可知,指标成分进样量在1000.01~10000.1μg/ml 之间,线性关系较好。

(2) 精密度试验:精密吸取浓度为5.00005mg/ml 的对照品溶液1μl ,连续进样5次,测得樟脑峰面积积分值。

结果如下表2所示:表2 精密度试验结果(n=5)序号 峰面积 平均峰面积 RSD/% 1 1257.5 1260.1 2 1264.9 3 1261.2 0.37 4 1263.8 5 1253.1由上表可知,仪器精密度良好。

(3) 稳定性试验:精密吸取浓度为5.00005mg/ml 的对照品溶液1μl ,每隔2h 进1针,连续考察8h 。

结果如下表3所示:稳定性试验结果(n=5)间隔时间/h 峰面积 平均峰面积 RSD/%0 1258.4 1255.1 0.20 2 1256.7 4 1255.5 6 1253.1 8 1251.7上述实验表明,指标成分在8h 内稳定性好。

(4) 专属性试验:在与样品测定完全相同的条件下,精密吸取1μl 阴性对照液(取缺少樟脑的样品,用与供试品溶液相同的方法,制得阴性对照液),连续进3针,与对照品、供试品色谱图比较(各色谱图标尺刻度相同),发现阴性无干扰。

说明十滴水软胶囊中樟脑的专属性较强。

(5) 重复性试验:取同一批号本品装量差异项下内容物,混匀,取约0.8g ,共6份,平行制备成6份供试液,测得样品中樟脑的含量。

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