地贫筛查中血红蛋白电泳教学
特定方向泳动,在一定的电压下经一定时间,可分 离出各自的区带。 主要类别:
醋酸纤维素膜电泳法 琼脂凝胶电泳法 HbA2含量测定: 洗脱法 扫描法
血红蛋白A2测定
不连续电泳将HbA2分离后,分别剪 出膜条中的HbA和HbA2区带,分别放
入试 管中,HbA加蒸馏水20ml, HbA2加
4ml ,浸泡30分钟,不定时摇动,使Hb完
地贫防治网站:
联系电话: (地贫检验) (地贫输血) (遗传咨询) (药物邮购)
谢谢!
染色与脱色 ↙↘扫描法
↙ 比色法:分区剪下色带,洗脱 分区切割色带,融化琼脂,干燥,透明→比色
血红蛋白电泳设备
醋酸纤维膜电泳
▊ ▋▋▉ ▋ ▋ ▋
H J KA
G D E 点样线→
正常→ ▉▍
▋▋
AF
A2 CA
HbA2的常用测定方法
原理:根据不同Hb自带电荷的不同、分子量大小的 不
同、结构和等电点的不同,在一定pH值的缓冲液中 朝
全 冼脱下来后混匀,用721分光光度计以
波
抗碱血红蛋白(HbF)测定
设备:721分光光度计,刻度吸管,秒表,玻璃漏 斗
,滤纸。
试剂:1/12mol/LKOH或NaOH溶液,酸性半饱 和硫酸
铵溶液。
方法:取两支试管,测定管加入溶血液0.1ml,对 照
管加入0.02ml,于测定管中加入KOH1.6ml,摇匀 ,
带 E.Hb↓MCV↓MCH↓ F.HbBart’s 区带在HbH区带后,泳动速度比HbH稍
慢 些,有Bart’s 区带,一般都有H区带,H含量高达30% 多,但不会超出40%,低少到1%左右。
HbA2 在血红蛋白病中的意义
HbA2组成: α2 δ2 HbA2参考值:1.2%-3.5% HbA2含量的改变: HbA2水平升高,是β
地贫筛查中的血红蛋白电泳 操作技术
第三0三医院血液实验室 王荣新
血红蛋白的组成
血红蛋白由血红素与珠蛋白组成 血红素:铁原子与原卟啉Ⅸ复合物。 珠蛋白:包括α、β、γ、δ、ε和ζ 珠蛋白6种。
血红蛋是由两种不同的鳌合了血红素的 珠蛋白肽链所形成的四聚体结构,在人体的 不同发育时期,其主要的血红蛋白(Hb)组 成不同。
全自动Hb电泳仪
目前国内使用的主要有 美国的Helena电泳仪、扫描仪和分析系统。 法国的Sebia电泳仪、扫描仪和分析系统。 国产的金桑特电泳仪、扫描仪和分析系统。
1.通过扫描定量给出HbA、 HbA2和HbF值。
2.异常区带通过查表确定。
HbE区带的鉴别
A.联苯胺染色,鉴定是否为Hb B.区带位于HbA2 区带位置上,在阴性(-)泳动
1分钟时立即加入酸性半饱和硫酸铵溶液3.4ml,倒
转6次,放10分钟,滤取溶液检测,用波长 540nm
HbCS的区带多在HbA2位置的 前 后,含量低,2%左右,很不稳定, 有时还可分开成三或四小区带,用 联苯胺染色可确定。HbE为慢速异 常区带,其位置相当于HbA2。 HbH和HbBart’s为快速异常区带。
临床常见的异常血红蛋白
以速度快慢排序 1.血红蛋白E/A2 2.血红蛋白D/S 3.血红蛋白G 4.血红蛋白K 5.血红蛋白J 6.血红蛋白H
Hb电泳操作中的经验与教训
1.RBC洗涤:离心的速度和时间要够,生理盐水与 血
比例要5:1,血浆与冼涤生理盐水要尽量吸干净。 2.制备溶血:加入的溜水、溶血剂与红细胞体积要 符合要求。离心的速度和时间要够。 3.点样:血红蛋白液适量,不能太宽。 4.电泳:醋纤膜浸泡时间要够长,平衡时间要够。 5.染色与脱色:时间要够。
人体发育过程中Hb的组成
发育期 胚胎期 胎儿期
0-2周岁左 右
2周岁后以后
血红蛋白 Gower1 Gower2 Porland
F A F
A A2 A A2 F
肽链组成
ζ2 ε2 α2 ε2 ζ2 γ2 α2 γ2 α2 β2 α2 γ2
α2 β2 α2 δ2 α2 β2 α2 δ2 α2 γ2
Hb的种类
地 贫基因携带者的特征性标志, 故HbA2定 量的准确与否,对于临床一线β地贫基因 携带者的筛查至关重要。
血红蛋白(Hb)病
1.血红蛋白病:基因突变导致合成的珠蛋白 肽链结构异常(如:镰状细胞血红蛋白病 /HbS) 2.地中海贫血:基因突变导致一种或多种珠 蛋白肽链合成减少或缺如(α/β地贫) 3.获得性血红蛋白病:接触或误服化学药物
速度最慢的一种异常Hb,难与A2区分开 C.HbA2定量在10%以上,应考虑为HbE D.HbE纯合子只有HbF和HbE,HbE高达95%
以上
HbH区带的鉴定
A.联苯胺染色,确定是否为Hb B.在阳极(+)泳动速度最大的Hb区带 C.HbH包含体阳性(+) D.pH6.5缓冲液(酸性)唯一向阳性(+)移动的Hb区
A.正常的Hb分.HA2(α2δ2)
B.异常Hb有两类 a.快速异常Hb:稳定Hb b.慢速异常Hb:不稳定Hb
基层常用的电泳分析方法
醋酸纤维膜电泳 琼脂凝胶电泳
醋酸纤维膜电泳→主要过程←琼脂凝胶电泳 ↓
RBC洗涤 ↓
制备溶血 ↓ 点样 ↓ 电泳 ↓
1.正常新生儿
9.轻型β地中海贫血
2.胎儿水肿综合征
10.异常HbD杂合子
3.α地中海贫血1(脐血)
11.异常HbG杂合子
4.HbCS-HbH病型
12.轻型β地中海贫血复合HbE
5.重型β地中海贫血复合HbE 13.正常成人
6.轻型β地中海贫血
14.正常成人
7.异常HbK杂合子
15.HbH病
8.异常HbJ杂合子
Hb病为世界上发病率最高危害最大的单基因遗 传病,被WHO列为严重危害人类健康六大疾病之
一。 全球约有4.83%的人口携带Hb病基因,每年各类 重型地贫(包括地贫复合异常Hb病类型)患儿的出生 率不低于2.4‰。据此推算,全球每年至少约35万Hb 病患儿出生; 至今为止,全球在分子水平上已鉴定出近1000 种不同的珠蛋白突变基因,其中包括700多种异常 Hb 变异体和200余种β地贫基因以及70多种α地贫突变 ,其中中国人群中异常Hb、β地贫基因和α地贫突变 各占70多种、34种和11种。