将得到的油脂进行甲酯化，用高效气相色谱分析成分。气相色谱分析条件为： 进样量 1 μL；柱温 210 ℃；FID 检测器，温度 250 ℃；进样器分流比，40:1， 温度 250 ℃。
1.2.3 碱溶酸沉法提取条斑紫菜蛋白的试验
（1） 紫菜蛋白质等电点测定 各取紫菜粉 4.00 g，加入 0.1 mol/L 的 NaCl 溶液 200 mL，磁力搅拌器搅拌均匀，调节 pH 值至 8.5，在 40 ℃浸提 2 h，浸提 液 4 000 r/min 离心 10 min 取上清液，扎袋用蒸馏水透析 48 h，减压浓缩，获 得蛋白溶液。用 pHS-3C 型酸度计指示，用 0.1 mol/L HCl 和 0.1 mol/L NaOH 调节蛋白质溶液的 pH 值，由 pH3 至 pH5.2 设 3、3.3、3.6、3.9、4.2、4.5、4.8、 5.1 共 8 个点，沉淀蛋白 30 min，4 000 r/min 离心 10 min，取沉淀干燥称重， 确定蛋白沉淀量最大时对应的 pH 值，即为紫菜蛋白的等电点。
蛋白质染色后迁移距离 (cm ) 溴酚蓝染色后迁移距离 (cm )
以标准蛋白质的迁移率为横坐标，以对数相对分子量（Mr）为纵坐标，绘制 标准曲线见图 5。测出样品的迁移率，从标准曲线中查出分子量的反对数即得条 斑紫菜蛋白的分子量。从图 5 中计算得出条斑紫菜蛋白的 2 个组分的相对分子量 分别为 38 kDa 和 42 kDa。这说明条斑紫菜蛋白由 2 个分子量相近的组分组成。
沉淀蛋白的质量/g
1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
2.5
3
3.5
4
4.5
5
5.5
pH
图 2 不同 pH 值时沉淀的紫菜蛋白质量
2.4 用 HPLC 分析条斑紫菜蛋白的组成结果 在 1.2.4 的 HPLC 分析条件下得到条斑紫菜蛋白的色谱图见图 3。
图 3 HPLC 分析条斑紫菜蛋白的色谱图 从图 3 中可看出，条斑紫菜蛋白的 HPLC 分析图谱主要由 2 个主峰构成，这 说明条斑紫菜蛋白的组成相对简单，主要由 2 个组分组成。
图 5 相对迁移率与分子量对数的关系
3 结论
采用高效气相色谱对产于江苏沿海的条斑紫菜油脂进行了成分分析，发现该 油脂主要由 EPA 和 DHA 组成，其中 EPA 的含量达到 76.05%。对条斑紫菜蛋白的 HPLC 分析和 SDS-PAGE 电泳分析结果表明：条斑紫菜蛋白主要由 2 个组分组成， 各自的相对分子量分别为 38 kDa 和 42 kDa。
（2） SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析条斑紫菜蛋白的组成 条斑紫菜蛋 白分子量用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定。电泳条件：电压约 90 V， 电泳时间 3.5 h。浓缩胶与分离胶的配方见表 1。
表 1 浓缩胶与分离胶的配方
溶液成分
体积 （T=5%）
体积 （T=10%）
30%凝 胶贮液
基金项目：江苏省高技术研究项目（项目编号：BG2003319） 作者简介：何荣海（1971-），男，江苏大学食品与生物工程学院讲师、博士。 E-mail：heronghai@ 通讯作者：马海乐 收稿日期：2007-08-17
我国是紫菜的主要生产国之一，其中江苏沿海所产条斑紫菜占我国总产量的 95%，年产量超过 10 亿张（每张 3 g）。但是国内紫菜加工非常初级，其主流产 品就是紫菜片和调味紫菜，技术含量低、附加值低，对于紫菜生产行业迫切需要 进行深层次、高附加值紫菜产品的开发，提升产业层次。为此有必要对紫菜的营 养成分及其组成进行分析，在已经发表的文献中，Kayama M.等[1]研究了日本产ຫໍສະໝຸດ /%成分水分
蛋白质
脂肪
总糖
灰分
含量
8.62
44.15
3.52
30.57
9.20
2.2 条斑紫菜油脂的气相色谱分析
在本试验中的超临界 CO2 萃取条件下，紫菜油脂的得率为 1.04%，对条斑紫 菜经过超临界 CO2 萃取的油脂甲酯化后进行气相色谱分析，结果见图 1。GC 色谱 表明：条斑紫菜油脂中的成分主要为 DHA 和 EPA，其中大部分为 EPA，占油脂总 量的 76.05%，而坛紫菜 EPA 含量为脂质总量的 24.5%[7]，说明条斑紫菜油脂中多
本研究以江苏南通产干条斑紫菜片为原料，对其所含油脂进行气相色谱分 析，并提取其蛋白进行分子量测定和蛋白质组成分析。
1 试验材料与方法
1.1 材料与仪器
条斑紫菜片：江苏省南通市兰波实业有限公司； 低分子量标准蛋白：上海东风生化试剂厂； 十二烷基磺酸钠（SDS）、丙稀酰胺、甲叉双丙稀酰胺、过硫酸铵（AP）：均 为分析纯，上海化学试剂公司； 考马斯亮蓝 G25：美国 AMRESCO 公司； N,N,N’,N’-四甲基乙二胺（TEMED）：Sigma 公司； 乙腈：色谱纯； 其它化学试剂：均为国产分析纯； HP-5890 型气相色谱系统：美国惠普公司； Agilent 1100 高效液相色谱系统：美国安捷伦公司； DYY-Ⅲ28A 和型垂直平板电泳槽和 DYY-Ⅲ电泳仪：北京六一仪器厂； pHS-3C 精密 pH 计:上海精密科学仪器有限公司。
参考文献 1 Kayama M,Lijima N,Kuwahara M,et al.Effect of water temperature on the
fatty acid composition of Porphyra[J].Bull Jap Soc Sic fish,1985(51):687. 2 曾繁杰,蒋丽金.中国坛紫菜和条斑紫菜中氨基酸组成和价值的研究[J].海 洋与湖沼,1991,22(6):590～593. 3 谢 士恩 ,林增 善,王伟 定, 等.坛紫 菜的 氨基酸分析 研究[J]. 海洋 水产 科 技,1994(1):9～18. 4 马家海,川和正允.浙江省象山港紫菜轮栽及其品质分析的研究[J].中国水 产科学,1997,4(1):30～37. 5 陈人弼.坛紫菜主要营养成分的分析 [J]. 台湾海峡,1999,18(4):465～
在这些研究中有人分析了产于日本的条斑紫菜油脂中脂肪酸组成，而对产于 中国沿海条斑紫菜的油脂组成还未见报道，由于产地的不同往往影响紫菜的营养 成分含量，因此,有必要研究产江苏沿海条斑紫菜油脂组成；另外在已经发表的 研究成果中对紫菜蛋白组成的相关研究还很少涉及，研究蛋白结构对于紫菜加工 利用有重要的意义。
(School of Food and Biological Engeering at Jiangsu University,Zhenjiang,Jiangsu 212013,China)
摘要：采用高效气相色谱法分析条斑紫菜油脂的组成，发现其主要由 EPA 和 DHA 组成。采用高效液相色谱法分析条斑紫菜蛋白的组成，并采用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分析其相对分子量，发现条斑紫菜蛋白其主要由相对分子量 分别为 38 kDa 和 42 kDa 2 个组分组成。 关键词：条斑紫菜；油脂；蛋白质；测定 Abstract: GC analysis of Porphyra yezoensis oil shows there are two main ingredients in the oil, they are EPA and DHA. The determination of Porphyra yezoensis protein with High Performance Liquid Chromatography and SDS-PAGE shows that the protein molecule is mainly composed of two subunits whose molecular weights are 38kDa and 42kDa, respectively. Keywords: Porphyra yezoensis；Oil；Protein；Components ——————————
1.2 试验方法
1.2.1 主要营养成分分析
条斑紫菜中水分:按照国家标准 GB/T5009.3-2003 测定；
蛋白质：按照国家标准 GB/T5009.5-2003， 凯氏定氮法测定；
脂肪：按照国家标准 GB/T5009.6-2003，索氏抽提法测定；
总糖：按照国家标准 GB/T5009.8-2003 测定；
2.5 条斑紫菜蛋白的 SDS-PAGE 电泳分析结果
从图 4 中可看出，条斑紫菜蛋白样品电泳后出现 2 条电泳带，说明蛋白由 2 个组分组成，这与 HPLC 分析的结果相一致。按下列公式计算迁移率（Rf 值）：
蛋白质迁移距离 (cm)
Rf= 溴酚蓝迁移距离 (cm) ＝ 染色前胶长度 (cm ) 染色后胶长度 (cm ) ×
1.2.4 条斑紫菜蛋白的组成分析
（1）高效液相色谱法分析条斑紫菜蛋白的组成 本研究采用反相高效液相
色谱（Reverse-Phase High-performance Liquid Chromatography，RP-HPLC） 分析条斑紫菜蛋白的组成[8,9]。所用仪器及分析条件为：Agilent 1100 高效液相 色谱系统，ZORBAX-C18 柱，柱温 25 ℃，紫外吸收检测器，检测波长 280 nm， 洗脱液为 10%乙腈、90%双蒸水，洗脱液流速 0.5 mL/min，进样量为 10 μL。
/mL 0.83
3.3
分离胶 缓冲液
/mL
去离子水 /mL
10%SDS /mL
0.63
3.4
0.05
2.5
4.0
0.1
10%AP /μL
25
50
TEMED /μL
5
4
2 结果与分析
2.1 主要营养成分分析
表 2 是条斑紫菜主要成分含量，其中蛋白质含量达 44.15%，总糖达 30.57%。