1、霍恩氏( Ho r n ) 法
所查表见急 性 毒 性 试 验(GB 1 5 1 9 3 . 3 -2 0 0)附录A
查表示例
2、概率单位法(机率单位— 对数图解法)
(1)预试验 以每组2只一3 只动物找出全死和全不死的剂量。 (2)动物数 每组不少于1 0 只， 各组动物数量不一定要求
4健康状况
在试验前检疫观察5-7天。 大动物的亚慢性和慢性试验， 在试验前还
应采血进行血液学和血液生化学检查， 剔 除异常的动物； 如对狗进行试验， 应常规 驱除肠道寄生虫。
二、染毒途径和方式
1、经口染毒 ① 灌胃 ② 喂饲 ③ 吞咽胶囊 2、经呼吸道染毒 ①静式吸入染毒：短时间染毒的试验 ②动式吸入染毒：较长时间以及反复染毒的试验 ③气管注入：仅限制造化学物对肺脏损伤模型
✓与SPF动物不同:抗体检查常发现脑 脊髓炎病毒、鼠肝炎病毒等抗体滴度 ，但不应有临床症状、病理改变及自 然死亡。 ✓饲养在半屏蔽系统中。
开放系统：饲育环境与外界相同，有强力通风设 施、饲料、饮水和垫料要求不被污染。应防鼠和 防昆虫措施。
屏蔽系统：饲育环境是密闭的。送入的空气需经 过滤，洁净度达万级。饲料、饮水和垫料要需经 灭菌，饲养人员进入要经过淋浴、穿无菌工作服、 戴口罩、手套。
小鼠体重与周龄的关系
周龄 昆明
雌性 雄性
0 1.95 2.10 1 5.54 5.82 2 7.90 8.35 3 13.55 14.80 4 21.35 22.60 5 27.90 33.25 6 32.80 39.25 7 34.70 39.90 8 34.80 40.05
品
BALB/c
雌性 雄性
短期内：一般为7天。
二、急性毒性试验的目的
确定化学物的致死剂量，评价化学物对机体的 急性毒性的大小、毒效应的特征和剂量-反应(效 应)关系，并根据LD50值进行急性毒性分级
为亚慢性、慢性毒性研究及其他毒理试验染毒 剂量的设计和观察指标的选择提供依据，为毒 作用机制研究提供线索。
三、实验动物的选择
隔离系统：是以一个隔离器为主体及其客观存在 附属装置组成的饲养系统。送入的全新风要经百 级以上洁净度过滤，一切物品都要经严格灭菌后 经传递仓送入，饲养人员不得入内。
一、实验动物的选择
(四)个体选择
1 年龄 2 性别 3 生理状态 4 健康状况
1 年龄
取决于试验的类型。
– 急性试验:成年动物； – 亚慢性、慢性试验:较年幼的或初断乳的动物，
观察期限：如受试动物于接触受试物后24～48h 内中毒死亡，未发现有迟发中毒作用时，一般 观察7～14d 即可。否则应适当延长观察期限， 直到中毒症状基本恢复正常为止，延长观察需 要2～4周。
五、经典急性致死毒性实验
(一) LD50的测定
查阅文献，确定预试剂量。 先用少量动物， 以较大的剂量间隔 （一般是按
1、霍恩氏( Ho r n ) 法
限定使用 4个剂量组， 剂量按等比级数。根据化 学毒物致死剂量范围的宽窄考虑两个剂量染毒系 列。
每组动物数相等 （如 4只系列或5 只系列） 根据死亡情况直接查表求出LD50及95%可信限。 方法简便， 使用动物数相对较少， 但是其95%可
信限的范围较大。
(1)预试验
剂量：10、100 和1000 m g / k g 体重 各以2只~3只动物预试。以24 h内死亡情况， 确定正式试
验的剂量组。 也可简单地采用一个剂量， 用5 只动物预试。观察2h内动
物的中毒表现。如症状严重， 估计多数动物可能死亡， 即可采用低于该剂量的剂量系列， 反之可采用高于此剂 量的剂量系列。 如有相应的文献资料时可不进行预试。
1.58 4.64 7.96 9.83 19.00 22.58 25.96 27.96 28.83
2性别
同一物种、 同一品系但不同性别的实验动物对化 学物毒性的敏感程度有时会有差别。
如试验对动物性别无特殊要求， 一般应选用雌雄 两种性别；
如果已知不同性别的动物对受试物的敏感程度不 同， 应选择敏感的性别；
相等。
2、概率单位法(机率单位— 对数图解法)
(3)剂量及分组 在预试得到的两个剂量组之间拟出等比的六个
剂量组或更多的组。 不要求剂量组间一定呈等比关系， 但等比可使
各点距离相等，有利于作图。
2、概率单位法(机率单位— 对数图解法)
(3)剂量及分组 在预试得到的两个剂量组之间拟出等比的六个
急性毒性实验 ：研究机体一次或24h内多次接触外源化 学物后，短期内发生的毒性效应的实验。
一次：含有时间因素。经口/注射染毒，指瞬间染毒； 经呼吸道/皮肤染毒，指在特定期间内持续接触化学物。
多次：当外源化学物毒性过低，或一次染毒剂量受机体 容量限制，需给予实验动物较大剂量时，则可在24h内 分次染毒。
1.40 3.35 5.50 7.32 11.60 14.75 15.60 16.10 18.16
1.46 3.50 5.60 7.40 12.45 16.10 17.40 18.65 20.25
系
C57BL/6
615
雌性 雄性 雌性 雄性
1.40 1.44 1.58 3.42 3.50 4.64 5.55 5.60 7.96 6.40 6.90 9.83 12.20 12.57 15.75 16.90 18.10 20.75 18.40 20.50 21.88 19.00 21.60 23.12 20.25 22.40 24.16
➢无 特 定 病 原 体 动 物 (Specific pathogen Free,SPF)：指体内无特定 的微生物和寄生虫存在的动物。实际 上是无传染病的动物，容许携带非特 定微生物。
✓来源于无菌动物和悉生动物，饲养于 封闭的系统中。 ✓国际上进行毒理学试验的标准实验动 物。
➢清洁动物 （ clean animal，CL ）: 又称最低限度疾病动物，动物体内 外不携带人畜共患疾病的病原体或 动物传染病病原体。
(二)品系选择
4、封闭群动物 ➢5年以上不从外部引进新血缘，仅由同一 品系的动物在固定场所保存繁殖的动物群 ➢可分为起源于近交系和不起源于近交系两 类 ➢不进行兄妹交配， 避免亲子、 表兄妹、 伯侄间交配，以保持遗传差异性。 ➢个体间具有一定程度的遗传学差异。
(二)品系选择
4、封闭群动物 ➢不同品系对外源化学物的毒性反应可能会 有差别， 要选择适宜的品系； ➢对某种外源化学物毒理学系列研究应固定 使用同一品系的动物，以求研究结果的稳 定性。
如实验中发现毒性反应存在性别差异， 则应对不 同性别动物的实验结果分别统计分析。
3生理状态
特殊生理状态 （如妊娠、 哺乳等） 对实验 结果影响很大
一般应选用未产未孕的雌性动物。 除进行与生殖有关的试验时需有计划地合
笼交配外， 雌雄动物应分笼饲养。
4健康状况
应选用健康的动物。
健康动物的要求：发育正常， 活动灵活， 体形健壮， 无外观畸形， 被毛浓密而有光 泽、 顺贴而不蓬乱， 眼睛明亮， 表皮无溃 疡和结痂， 眼、 呼吸道等孔道无分泌物， 饮食和排便正进行试验。 实验开始前应观察一周以上。
初成年者
➢ 大白鼠、小白鼠为出生后2～3个月左右，体重 分别为180～220g和18～22g；
➢ 家兔为2～2.5kg； ➢ 猫为1.5～2kg； ➢ 狗为出生后一年左右。
四、毒性反应的观察与检查
观察项目： 中毒症状的特点和出现时间，中毒 症状恢复时间，动物发生中毒死亡的时间及死 亡数，死亡动物必须的病理解剖检查观察等。
3、经皮肤染毒 皮肤接触化学物的面积、时间长短、环境中温、
湿度均应控制统一的条件。
4、注射途径染毒 包括：静脉注射、肌肉注射、皮下注射及小动
物腹腔注射染毒
用于：绝对毒性或比较毒性研究，或进行一些 必要的特殊研究(如静脉注射毒物动力学、代谢 研究、急救药物筛选等)
一、急性毒性(acute toxicity)实验
1、霍恩氏( Ho r n ) 法
(2)正式试验 动物在实验动物房饲养观察3 天一5 天， 适应环
境， 证明健康后， 随机分组。 给予受试物后一般观察7 天或1 4天， 若给予后的
第4天继续有死亡时， 需观察 1 4 天， 必要时延 长到2 8天。 记录死亡数， 查表求得LD 50 ， 并记录死亡时间 及中毒表现等。
首选受试物在体内代谢情况与人体内相近的或对受试物 最敏感的品系(如对黄曲霉素选择雏鸭， 对氰化物选择 鸟类。)
一般选用两种以上的实验动物。 动物应注明来源及品系。 除特殊要求外，动物年龄一般选用初成年者。 体重差异≤平均体重的10%。 数量：大白鼠和小白鼠每组10只以上；较大的动物如狗、家兔等
(二)品系选择
2、突变系动物 ➢动物在生长繁殖过程中，通过自然突变或 人工定向突变的办法，使其某基因发生突 变并丧失原有的正常功能。这种突变的基 因可以世代相传并保持遗传基因特性的品 系动物，称为突变系动物。 ➢在免疫毒理学、化学致癌作用等研究中得 到应用。
(二)品系选择
3、杂交群动物
➢两个不同近交系之间有目的进行交配，所产生 的第一代动物，亦称杂交一代动物。 ➢有两系双亲所有遗传特性，子代个体是杂种， 但杂合的程度一致， 具有与纯种动物局部相同的 遗传均质性，个体差异小； ➢具备杂交优势，生命力强； ➢无近亲衰退现象。 ➢但只能供实验用，不能继续繁殖育种， 因在子 二代时，会发生遗传性状的分离。
一、实验动物的选择
(三)微生物控制的选择
➢无菌动物(germ-free animal;GF ) ：指体内外均无任何微生物和寄生 虫的动物。经人工剖腹产净化培育 出来的。
➢悉生动物 (gnotobiotic animal;GN ) ：又称已知菌动物，指体内带有已知 微生物的动物。
✓经人工有计划地将已知菌投入动物体 内。 ✓比无菌动物生命力强。 ✓有些化学物质的毒性作用与肠道细菌 的代谢产物有关，用含肠道菌的悉生动 物进行试验比用无菌动物可得到更真实 的毒性反应结果。