A）15一、获取目的基因
2、获取方法： （1）从基因中获取基因组和cDNA的构建和比较
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一、获取目的：
要对天然质粒进行人工改造
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练习
1.以下说法正确的是（C ）
A、所有的限制酶只识别一种特定的核苷酸序 列
B、质粒是基因工程中唯一的运载体
C、运载体必须具备的条件之一是：具有一个 或多个限制酶切点，以便与外源基因连接
D、DNA连接酶使黏性末段的碱基之间形成 氢键
8
练习
2. 不 属 于 质 粒 被 选 为 基 因 运 载 体 的 理 由 是
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二、基因表达载体的构建
1、目的：
（1）使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以
遗传 给下一代； （2）使目的基因能够
表达 和发挥作用
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二、基因表达载体的构建
限制酶
具有黏性末 端的载体
具有相同黏性末 端的目的基因
DNA连接酶
重组DNA分子 （重组载体）
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二、基因表达载体的构建
（D ）
A、能复制 B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA
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练习
3.有关基因工程的叙述中，错误的是（ D ） A、基因工程技术能定向地改造生物的遗传性
状，培育生物新品种 B、重组DNA的形成在生物体外完成 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、质粒都可作为运载体
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练习
①
···CTGCA ②···AC ③GC··· ④···G
单链
酶： 热稳定DNA聚合酶（Taq酶） 温度控制： 高温→低温→中温
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一、获取目的基因
2、获取方法： （2）用PCR技术扩增目的基因 PCR结果： 使目的基因以 指数 形式在短时间内大
量扩增。
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一、获取目的基因
2、获取方法： （3）用化学方法人工合成
如果基因比较小， 核苷酸序列 又已知，可以 通过 DNA合成仪 用化学方法直接人工合成
酸序列，并使每一条链中特定部位的 两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。
3、特点： 特异性----特定序列、特定位点 4、结果： 形成DNA的双链片段
黏性末端 片段的末端的形式
平末端
4
（二） DNA连接酶---“分子缝合针”
1、种类：两类
E·coli DNA连接酶:连接黏性末端 T4 DNA连接酶 ：连接黏性末端和 平末端
基本过程 获取基因—体外重组—导入基因—表达基因
结果
人类需要的新的生物类型和生物产品
2
二、DNA重组技术的基本工具
限制性核酸内切酶——“分子手术刀” DNA连接酶——“分子缝合针” 载体——“分子运输车”
3
(一）限制性核酸内切酶（限制酶）---“分子手 术刀”
1、来源：主要是从原核生物中分离纯化而来 2、作用：识别某种双链DNA分子特定的核苷
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一、获取目的基因
2、获取方法： （2）用PCR技术扩增目的基因 过程： 90℃-95℃：目的基因的双链模板在热力作用下， 氢键 断裂，形成单链DNA; 55℃-60℃： 引物 与单链模板相应互补序列结合； 70℃-75℃：在 DNA聚合酶（Taq酶） 作用下进 行延伸。
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一、获取目的基因
2、获取方法： （2）用PCR技术扩增目的基因 PCR技术的条件： 模板： 目的基因两条链 原料： 四种游离的脱氧核苷酸 引物：（一小段与目的基因模板链互补的）一对DNA
2、作用部位：磷酸二酯键
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（三） 运载体---“分子运输车”
1、运载体的作用： （1）将目的基因转移到受体细胞中去； （2）使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传； （3）使目的基因能够表达和发挥作用。
2、运载体必须具备的条件：
（1）具有一个或多个限制酶切点，以便与目的基因连接；
（2） 能够在受体细胞中复制并稳定地保存，以便目的基
3、组成：
启动子+目的基因+终止子+标记基因+(复制原点）
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三、将目的基因导入受体细胞
1、转化的概念 2、转化的方法 此外 植物：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 还有 动物：显微注射技术
依据基因的核苷酸序列、基因的功能、 基因在染色体上的位置、基因的转录产物 mRNA，以及基因的表达产物蛋白质等特 性来获取目的基因。
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一、获取目的基因
2、获取方法： （2）用PCR技术扩增目的基因 PCR技术：在生物 体外 复制特定 DNA片段 的 核酸合成技术。 PCR技术原理： DNA双链复制 。
···G
···TG CG··· ⑧···CTTAA
⑤ G··· ⑥···GC ⑦ GT··· AATTC···
ACGTC··· ···CG CA··· G···
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第5章 生态系统及其稳定性
2.2 基因工程的基本操作程序
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基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：
1、 目的基因的获取 ； 2、 基因表达载体的构建； 3、 将目的基因导入受体细胞 ； 4、 目的基因的检测与鉴定 。 其中核心是 基因表达载体的构建 。
因的遗传；
（3）具有某些标记基因，以便进行重组DNA的筛选。
（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因
等 ）；
（4）对受体细胞无害；
（5） 大小合适，以便提取和体外操作。
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常用的运载体有：
质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒等
质粒是基因工程最 常用的运载体，它广泛 地存在于细菌中，是细 菌拟核DNA外能够自主 复制的很小的环状DNA 分子，大小只有普通细 菌拟核DNA的百分之一。
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一、获取目的基因
1、目的基因：在基因操作中使用的外源基因。它 主要是 编码蛋白质 的基因，也可以是一些具有调 控作用的因子。
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一、获取目的同基因的许多DNA片 段，导入到受体菌的群体中储存，各个受体具
1
一、基因工程的概念
基因工程是指按照 人们的意愿 ，进行严格的 设计，并通过 DNA重组 和 转基因 技术，赋 予生物以新的 遗传特性 ，从而创造出更符合人 们需要的新的 生物类型 和 生物产品 。
基因工程的别名 DNA重组技术
操作环境
生物体外
操作对象
基因
操作水平
DNA分子水平