内因：1）抗体的特异性和亲和力 2）抗原理化性质、抗原表位多寡和种类 3）抗原抗体的浓度、比例 （影响最大，决定因素） 外因：1）电解质 使抗原-抗体复合物失 去电荷而凝集，出现可见反应 2）酸碱度 最适pH6～8 3）温度 适宜（可增加抗原 与抗体的碰撞机会，加快结合速度）
三、抗原-抗体反应的基本检测方法
荧光素与抗体连接，再与抗原反应（对抗原定性或定位）
（2）酶免疫测定
将抗原-抗体反应的特异性与酶催化作用的高效 性相结合，借助酶作用于底物的显色反应判定结果。
酶联免疫吸附试验(ELISA)：测定可溶性抗原或抗体。
双抗体夹心法 间接法 酶联免疫斑点实验 ELISPOT BAS-ELISA（生物素-亲和素系统） 免疫组化技术：应用标记的抗体与组 织或细胞抗原发生反应，结合形态学观 察，对组织或细胞表面抗原进行定性、 定量、定位。
BAS-ELISA
生物素-亲和素系统 借助所形成的亲和素-生物素-酶复合物追踪生物 素标记的抗原或抗体，通过酶催化底物显色，可检 出相应抗体或抗原。 原理：生物素与亲和素的高度亲和力、 生物素能与抗体结合
（3）放射免疫测定法
用放射性核素标记抗原或抗体进行免疫学检测。 该法兼有放射性核素的高灵敏度和抗原-抗体反应的 特异性。
学习目的 ：
一、掌握抗原-抗体结合反应的特点
二、了解影响抗原-抗体反应的因素
三、学习抗原-抗体反应的基本检测方法
抗原-抗体反应：
指抗原与相应抗体在体内或体外发生 的特异性结合反应。 主要应用：
用已知抗原检测未知抗体 用已知抗体检测未知抗原 定性或定量检测体内各种大分子 物质 用已知抗体检测某些药物、激素和 炎性介质等各种半抗原物质
免疫标记技术：
（1）免疫荧光法 （2）酶免疫测定 （3）放射免疫测定法 （4）化学发光免疫分析 （5）免疫印迹法
（1）免疫荧光法
间接荧光法 优点:敏感度比直接法高，制备一种荧光素标记的二 抗即可用于多种抗原的检测。 缺点：非特异性反应亦增强。 直接荧光法 优点:特异性高 缺点:检查任一 抗原均须制备相 应荧光抗体。
A.前带现象：抗体过剩 B.后带现象：抗原过剩
过剩方结合价未被完全占据， 成游离小分子复合物或解离， 不可见
C.网格复合体：抗原、抗体的数量比例合适。
反应体系基本不存在游离的抗原或抗体，形成肉眼可见 的反应物（沉淀物或凝集物）。
可逆性
抗原-抗体反应为分子表面的非共 价键结合，结合虽稳定但可逆。
二、抗原-抗体反应的影响因素
（4）化学发光免疫分析
将发光物质（如吖啶酯、鲁米诺等）标记抗 原或抗体，发光物质在反应剂（如过氧化阴离 子）激发下生成激发态中间体，当回复至 稳定的基态时发射光子，通过自动发光 分析仪测定光子产量，可反映待检样品 中抗体或抗原含量。
（5）免疫印迹法
又称Western印迹法，其结合凝胶电泳与固相免疫 技术，将借助电泳所区分的蛋白质转移至固相载体， 再应用酶免疫、放射免疫等技术进行检测。 该法能对分子大小不同的蛋白质进行分离并确定 其分子量，常用于检测多种病毒抗体或抗原。
A: 用已知抗原检测分泌特异性 抗原的B细胞：
用已知抗原包被固相载体，B 细胞分泌的抗体与之结合，加 入酶标记的第二抗体，通过底 物显色反应可检测B细胞分泌的 特异性抗体。
B:用抗细胞因子抗体检测 细胞分泌的细胞因子：
用抗细胞因子抗体包被 固相载体，加入不同来源的 细胞，细胞分泌的细胞因子 与包被抗ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ结合，再加入酶 标记的抗细胞因子抗体，通 过底物显色反应测定结合在 固相载体上的细胞因子。
双抗体夹心法：用于检测特异性抗原。 操作步骤： 用已知抗体包板→ 洗涤→ 封板→ 洗涤→ 加入 待检标本→ 洗涤→ 加酶标抗体→ 洗涤→ 加底物显 色→ 结果观察
间接法：用于检测特异性抗体。
基本步骤：用已知抗原包板→洗涤→加入待检抗体→ 洗涤→加酶标二抗→洗涤→加底物显色→观察结果
酶联免疫斑点实验
免疫电泳
常用于血清蛋白的组分分析
免疫比浊
在一定量的抗体中，分别加入递增量的抗原，经 一定时间后形成抗原抗体复合物，用浊度计测量反 应液体的浊度，并与一系列标准品对照，由此推算 样品中的抗原含量。 原理：抗体浓度（高浓度）固定时，形成的免疫复 合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液 的浊度也随之增加。
一、抗原-抗体结合反应的特点
高度特异性
定义：一种抗原通常仅能与由它刺激所产生的抗体 结合。 分子基础：抗原表位与抗体的抗原结合部位间存在 分子结构的互补性，二者可特异性结合。
交叉反应
共同抗原决定基刺激机体产生的抗 体分别与两种抗原 ( 共同抗原 ) 结合发 生反应。 机理：具有相同的抗原表位
抗原-抗体结合的带现象与可见性
凝集反应：细菌或红细胞等颗粒性抗原与相 应抗体直接反应出现凝集。 沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体结合后， 在一定条件下出现肉眼可见的沉淀。 补体参与的反应：应用抗体与红细胞表面抗 原结合，激活反应体系中的补体成分， 根据溶血现象判定试验结果。 免疫标记技术：用荧光素、酶、 放射性核素或化学发光物质等标 记抗体或抗原，进行抗原-抗体 反应的检测.
单向免疫扩散：
用途：可用于测定血清IgG IgM IgA 和C3等的含量 原理：沉淀环的直径与抗原含量呈正相关
特点：定性半定量 操作： 铺板 ↓ 打孔 ↓ 加样 ↓ 放湿盒 ↓ 看结果
双向免疫扩散
用途：鉴定两种抗原是否相同
特点：定性半定量
操作： 铺板 ↓ 打孔 ↓ 加样 ↓ 放湿盒 ↓ 看结果