香料香精化妆品 2008年 6 月第 3期
FLAVOUR FRAGRANCE COSMETICS June, 2008, NO1 3
研究报告
微生物酵素 是以新鲜蔬菜、水果为原 料, 经 多 种益生菌发酵而产生的, 含有丰富的酶、维生素、矿 物质和次生代谢产物的微生物制剂。
本实验采用体外实验和人体实验, 对微生物酵 素的美容功效进行评价, 包括酵素的美白功效和抗 衰老功效。 1 材料与方法 1. 1 仪器和试剂 1. 1. 1 主要仪器
DPP H 清除率= 100% @[ 对照- ( 样品- 空白 + 水) ] / 对照。 1. 5 人体皮肤纹理度实验
测试对象与测试方法同 1. 3. 3, 受试者使 用凝 胶为 1. 3. 2 中配制成的酵素凝胶。受试者在连续使 用酵素凝胶一周、两周、三周、四周、五周、六周、七 周和八周后, 使用皮肤图像分析系统( Skin Visiom2 et er SV600) 测拍实验部位涂抹化妆品前后的 皮肤
配制化妆品之前要先将粉状酵素进行预处理, 目的
是除去其中的不溶性成分。粉状酵素预 处理流程
为: 于去离子水中加入一定量酵素, 放 入 37 e 水浴
搅拌 10min, 然后在 8000 r/ min 下离心 10min, 便得
到粉状酵素预处理液。
1. 3. 2 酵素凝胶的配制
分别把膏状酵素和粉状酵素配制成凝胶, 配制
分光光度计, 型号 UV2300, 上海天美科学仪器 有限公司; 皮肤黑素和血红素测试仪, 型号 Mexam2 et er MX18, 德国 CK 电子公司; Skin Visiometer, 型 号 SV600, Courge+ Khazaka Cologne Ger many。 1. 1. 2 主要材料和试剂
人体实验一般以人体前臂皮肤为受试部位, 以 避免光照对于皮肤 色度的影响。将美白剂涂于 人
体皮肤上, 用皮肤颜色测定仪观察涂敷美白剂前后
肤色的变化, 评价美白效果。皮肤肤色的测定可使
用 Mexamet er MX18 皮肤 黑素血红素检 测仪进行
检测。
1. 3. 1 粉状酵素预处理
由于粉状酵素中含有不溶于水的成分, 所以在
研究报告
香料香精化妆品 2008 年 6 月第 3 期
FLAVOUR FRAGRANCE COSMETICS June, 2008, NO1 3
微生物酵素美白抗衰老功效研究
作者
1. 北京工商大学植物资源研究开发重点实验室, 北京 100037; 2. 北京保罗科技发展有限公司, 北京 101113
……………………………………………………………… 任 清1 于晓艳1 潘 妍1 刘 杰2 胡英杰2 董银卯1
四周、五周、六周、七周和八周后, 使用皮 肤黑素和
血红素测试仪测试皮肤颜色的变化。
½ 受试者将涂抹部位洗净, 由测试者使用皮肤
黑素和血 红素测 试仪测 定涂 抹部位 的黑 素含 量。
每点测五次, 取平均值。
¾ 统计受试者实验部位每次化规律。
1. 4 酵素的抗氧化功效评价
纹理的变化, 记录拍照。每次测试时受试者将涂抹
表 2 抗氧化实验体系加样表
部位洗净。最后观察受试 者实验部位每 次的测试
样品
抗氧化剂 0. 1
H 2O 0. 9
DP P H 2
照片, 分析其皮肤纹理的变化规律。 2 结果与分析
空白
0. 1
2. 9
0
对照
0
1
2
常 温 静 置 45min, 然 后 在 520nm 下 测 其 吸 光度。
1. 2. 2 实验操作 实验方法基本按照参考文献[ 1] 进行, 稍加改动。
具体为: 在各试管中分别加入磷酸缓冲液( pH 6. 8, 0. 1 mol/ L) 、样品液、酪氨 酸溶液。置于 37 e 水浴 中 10min, 然后加入酪氨酸酶, 再于 37 e 水浴中反应 10min, 在 475nm 下测吸光度值。实验体系设计见 表 1, C1 为空白 对照, C2 用于空 白调零, T1 为 样品 管, T 2 用于样品调零。
º 首先使用皮肤黑素和血红素测试仪测定实
验部位涂抹化妆品前的黑素含量。每点测五次, 取
平均值。
» 受试者在左手臂实验部位涂抹膏状酵素凝
胶, 右手臂实 验部位涂抹粉状酵 素凝胶, 每天早晚
涂抹两次; 空白部 位不涂抹化妆品。实验期间, 受
试者在实验部位不能涂抹其它任何化妆品。
¼ 受试者在连续使用化妆品一周、两周、三周、
2. 1 酪氨酸酶抑制实验 采用吸光光度法测定 膏状酵素和粉 状酵素对
酪氨酸酶的抑制率。从表 3 的实验结果可以看出, 膏状酵素对酪氨酸酶的抑制率都高于 80% , 而且随 着浓度的升高而升高, 5% 膏状酵素对酪 氨酸酶的 抑制率接近 100% , 说明膏状酵 素能有效地阻断黑 素的形成。不同浓度的粉 状酵素对酪氨 酸酶的抑 制率测得为负值或很小( 多次测量结果稍有差别) 。 将粉状酵素分次称量, 慢慢溶解, 37 e 下恒温 16 个 小时, 进行活化, 离心后取上清液测定, 效果仍然不 好, 抑制率仍为负值。因此推断粉状酵素本身可能 含有酪氨酸酶, 其美白机理有待进一步研究。
表 1 酪氨酸酶抑制实验体系加样表
试剂 P BS
C1 / mL 2
C2/ m L 2. 5
T 1/ mL 1
T2 / mL 1. 5
样品
0
0
1
1
L2 酪氨酸
1
1
1
1
酪氨酸酶液
0. 5
0
0. 5
0
酪氨酸酶抑制率= ( 空白对照吸光度值- 样品 吸光度值) / 空白对照吸光度值 @100% 1. 3 酵素美白功效人体实验
流程为: 称取 2% 的膏状酵素( 或 2% 的粉状酵素预
处理液) 、4% 甘油、3% 丙二醇、0. 3% 水 溶霍 霍巴
油, 加入去离 子水至 98% , 搅 拌 10min 后, 再 加入
0. 5% LGP 和 1. 5% AVC, 搅拌至所有物质混合均
匀, 即得凝胶。
1. 3. 3 人体测试方法
作者简介
任清( 19692) , 男( 汉) , 河北康保 人, 讲师, 博士, 联系电话: 010268984940
摘要
本实验通过体外实验和人体实验两种方法, 对酵素 的美白抗衰老功效进行研究。酵素酪氨酸酶抑制 实验中, 浓度为 1% 、 2% 和 5% 的膏状酵素酪氨酸酶抑制率分别为 88. 41% 、96. 35% 和 99. 87% , 粉状 酵素对 酪氨酸 酶的抑制 率为负 值; 利 用黑色 素和血红素测定仪定期测定受试者涂抹区域黑色素变化, 实验 证明, 添加 膏状酵 素和粉状 酵素凝 胶均有 美白作 用, 且 膏状酵 素美白作用优于粉状酵素。 抗氧 化实 验证 明 膏状 酵素 有 好的 抗氧 化 能力。 皮肤 纹理 度 实验 说明 二 者都 有一 定 的抗 衰老 能力。
膏状酵素和粉状酵素, 由北京保罗科技发展有 限公司提供; 酪氨酸酶, 购于美国 sigma 公司; DP2 P H , 以无水乙醇作溶剂, 浓度为 0. 1777mol/ L。其 它试剂为常规试剂。 1. 2 酪氨酸酶抑制实验 1. 2. 1 样品处理
分别配制浓度为 1% 、2% 和 5% 的膏状酵素和 粉状酵素溶液, 其中 膏状 酵素水 溶性 好可 直接 溶 解, 粉状酵素水溶 性不好, 经 搅拌、混 匀、离心等 处 理后吸取澄清部分待测。
采用 DP PH 法, 检测酵素的总抗氧化能力, 按
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) 29 )
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照参考文献[ 2] 的方法稍加改动。具体方法为:
Abstr a ct T his experiment was to evaluate the skin2whit ening and anti2aging efficacy of microbial ferment thr ough vit ro exper i2 ment and human exper iment. The micr obial ferment t yrosinase act ivit y inhibit ion exper iments proved that the paste micr obial ferment had a stronger inhibition to tyrosinase. T he t yrosinases inhibitory rates of 1% , 2% , and 5% paste microbial fer ment wer e 88. 41% , 96. 35% , and 99. 87% r espectively, and the t yrosinase inhibitor y rates of powdery micr obial ferment were nega2 t ive. M easure the smear site with the measur ement instrument s ever y week to show the change of the melanin. The r esults show that both of them have the skin2whitening efficacy, but the paste microbial fer ment's efficacy is better than t he powdery microbial ferment. Antioxidation experiment proved the paste micr obial ferment was a good antioxidant. The skin vein exper i2