实验七、甜味剂--糖精钠的测定－薄层色谱法
GB/T 5009.28-2003
糖精及其钠盐是使用较广的甜味剂之一，它的化学名是邻磺酰苯亚
胺（O-sulfobenzolc acidimide）,分子式为C
7H
5
SO
3
N,白色结晶或粉状，
无臭或微有酸性芳香气，在水中溶解度极小，味极甜。
糖精钠进入人体后
不分解，不供给热能，无营养价值，随尿排除体外。
我国《食品添加剂使
用卫生标准》规定，糖精钠用于饮料、酱菜类、复合调味料、蜜饯、雪糕、
配制酒、冰棒、糕点、饼干、面包等食品，最大使用量(以糖精计)为0.15g／kg；高糖果汁(果味)饮料按稀释倍数的80 %加入，瓜子的最大使用量为1.2g／kg；话梅、陈皮等的最大使用量为5.0g／kg。
测定糖精的方法较多，有薄层色谱法、纳氏比色法、硫代二苯胺比色法及紫外分光光度法等。
一、紫外分光光度法
1. 原理
样品经处理后，在酸性条件下用乙醚提取食品中的糖精钠，经薄层分离后，溶于碳酸氢钠溶液中，于波长270nm处测定吸光度，与标准液比较定量。
2. 试剂与仪器
(1) 2 %碳酸氢钠溶液
(2) 4 %氢氧化钠溶液
(3) 6 mol/L HCl溶液
(4) 乙醚（不含过氧化物）
(5) 10 %硫酸铜
(6) 无水硫酸钠
(7) 0.02 mol/L氢氧化钠
(8) 硅胶GF
254
(9) 聚酰胺，200目
(10) 糖精钠标准溶液：准确称取0.0851 g经120 ℃干燥4 h后的糖精钠，加乙醇溶解，移入100 mL
容量瓶中，加乙醇（95 %）稀释至刻度，此溶液每毫升相当于1 mg糖精钠（C
6H
4
CONNaSO
2
.2H
2
O）。
(11) 展开剂：苯-乙酸乙酯-乙酸（12:7:3），硅胶薄层用。
(12) 展开剂：正丁醇-浓氨水-无水乙醇（7:1:2），聚酰胺薄层用
(13) 显色剂：0.04%溴甲酚紫的50%乙醇溶液，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调至PH值为8
(14) 紫外光灯(波长253.7nm),紫外分光光度计
(15) 薄层板10×20cm；展开槽
(16) 微量注射器
3.测定方法
(1)样品提取
1)饮料、冰棍、汽水类：取10 ml均样置100 ml分液漏斗中，加2 ml 6mol/L盐酸，用30、20、
20 ml乙醚提取三次。
合并乙醚提取液，用5 ml盐酸酸化的水洗涤一次，以洗去水溶性杂质，弃
去水层。
乙醚层通过无水硫酸钠脱水后，挥发干乙醚。
加20 ml乙醇溶解残渣，密封保存，备用。
2)酱油、果汁、果酱、乳等：称取20.0g或吸取20.0ml均样置100ml容量瓶中，加水至约60ml，
加20ml10%硫酸铜溶液，混匀,再滴加4.4ml4%氢氧化钠溶液，加水至刻度，混匀。
静置30min后过滤，取滤液50ml置150ml分液漏斗中，以下同1)中后序操作。
3)固体果汁粉等：先称取20.0g磨碎的均样，置200ml容量瓶中，加100ml水，加温使其溶解，
冷却后再按上述方法进行提取。
4)糕点、饼干等蛋白质、脂肪含量高的样品：均应采用透析法处理，使分子量较小的糖精钠渗入
溶液中，以消除蛋白质、淀粉、脂肪等的干扰。
称取捣碎、混匀的样品25.0g置透析玻璃纸内，置于大小合适的烧杯中。
加50ml0.02mol/L氢氧化钠溶液于透析膜内，充分混合，使样品成糊状，将玻璃纸口扎紧，放入盛有200ml 0.02mol/L氢氧化钠的烧杯中，盖上表面皿，透析过夜。
量取125ml透析液（相当于12.5g样品），加约0.4ml 6mol/L盐酸，使成中性，加20ml 10%硫酸铜混匀，加4.4ml4%氢氧化钠，混匀，静置30min，过滤。
取120ml滤液置250ml 分液漏斗中，以下同 1)中后序操作。
(2)薄层板制备
薄层板可以是硅胶GF
254
或聚酰胺薄层板，使用时选用一种。
①硅胶GF
254薄层板：称取1.4 g硅胶GF
254
，加4.5 ml 0.5 % CMC-Na溶液于小研钵中研匀，倒
在玻璃板上，涂成0.25-0.30 mm厚的薄层板，稍干后，在110℃下活化1 h，取出后置于干燥器内备用。
②聚酰胺薄层板：称取1.6 g聚酰胺，加0.4g可溶性淀粉，加约15ml水，研磨3-5分钟，使
其均匀即涂成0.25-0.30 mm厚的10*20 cm薄层板，室温下干燥，在80℃烘箱中干燥1h，置干燥器内备用。
(3)点样
在薄层板下端2 cm处，用微量注射器点10 µL和20 µL的样液二个点，同时点3.0，5.0，7.0，
10.0 µL糖精钠标准溶液，各点间距1.5 cm条的右端1.5 cm处。
(4)展开
将点好的薄层板放入盛有展开槽中，展开剂液层约0.5 cm，并预先已达到饱和状态。
展开至10 cm，取出薄层板，挥发干。
硅胶GF
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板可直接在波长254 nm紫外线灯下观察糖精钠
的荧光斑点。
把斑点连同硅胶GF
254
或聚酰胺刮入小烧杯中，同时刮一块与样品条状大小相同的空白薄层板，置于另一烧杯中做对照，各加5.0 ml 2 %碳酸氢钠，于50 ℃水浴中加热助溶，移入10 ml离心管中，离心分离（3000 r/min）20 min，取上清液备用。
(5)标准曲线绘制
吸取0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml糖精钠标准液A，分别置于100ml容量瓶中，各以2 %
碳酸氢钠溶液定容，于270nm波长处测定吸光度，绘制标准曲线。
(6)样品测定
将经薄层分离的样品离心液及试剂空白液于270 nm处测定吸光度，从标准曲线上查出相应浓度。
结果计算如下：
（C
1 - C
）× V
3
糖精钠（g/Kg或g/L）=------------------
W × (V
2/ V
1
）
式中：C
1
：测定用样液中糖精钠含量mg/ml。
C
：空白液中糖精钠含量mg/ml
V
1
：溶解样品残留物加入乙醇的体积ml。
V
2
：点样液的体积ml。
V
3
：溶解刮下的糖精钠时所用2 %碳酸氢钠溶液体积ml。
W：样品残留物相当的原样品重量g或ml。
4. 注意事项
(1)样品提取时加入CuSO
4
及NaOH用于沉淀蛋白质，防止用乙醚萃取发生乳化，其用量可根据样品情况按比例增减。
(2)样品处理液酸化的目的是使糖精钠转化成糖精，以便用乙醚提取，因为糖精易溶于乙醚，而糖
精钠难溶于乙醚。
(3)富含脂肪的样品，为防止用乙醚萃取糖精时发生乳化，可先在碱性条件下用乙醚萃取脂肪，然
后酸化，再用乙醚提取糖精。
(4)对含CO
2的饮料，应除CO
2
，否则将影响样液的体积。
(5)聚酰胺薄层板，烘干温度不能高于80℃，否则聚酰胺变色。
(6)在薄层板上的点样量，应估计其中糖精含量在0.1-0.5 mg。