实 验 一 乳酸菌的分离及初步鉴定
主讲：郑海涛
一、实验目的
1、学习掌握食品中乳酸杆菌的常规分离
方法并作初步的鉴别。
2、学会十倍系列稀释和倒平板的方法。
二、实验原理
乳酸杆菌为厌氧和微好氧菌，革兰氏 染色阳性，可以发酵葡萄糖或乳糖产生乳 酸，并将培养基中的碳酸钙溶解。有些菌 如 保 加 利 亚 乳 杆 菌 在 15℃ 时 不 生 长 ， 在 45℃ 甚 至 50℃ 时 生 长 ， 最 适 生 长 温 度 为 40—43℃；而有些菌如植物乳杆菌在 15℃ 生长， 45℃时一般不生长，最适生长温度 为 30℃左右。通常我们利用这些特点可作 初步的鉴别。
五、实验结果观察
24或48小时后取出检查。 （1）泡菜汁样品中，菌落周围产生CaCO3圈， 菌落直径为1～3mm，乳白色偶有浓色或暗黄色。 用接种环挑少许涂片。革兰氏染色镜检为G+， 菌体大小约0.9～1.2×3～8m，单生，成对或 短链。 （2）酸牛奶样品中菌落直径1～3mm，无色素， 呈白色至淡灰色。通常菌落表面粗糙，革兰氏 染色镜检为G+，细胞宽2m，细胞较长有时呈 线形，幼龄培养物中单生或成对。
六、思考题
1、融化后的培养基为什么要迅速冷却到 50℃左右倒平板？ 2、培养基中加入CaCO3的目的是什么？
谢
菜汁1管，9ml生理盐水5管， MRS 培养基100ml，灭菌CaCO3 3克（用纸包）。
2、40℃和30℃恒温箱，振荡器，超净工作台，1ml无
菌吸管5支，培养皿6套，革兰氏染色液1套。
四、实验方法与步骤
1. 将酸奶和泡菜汁分别制成10倍系列稀释液。 2. 取适当稀释度之稀释液0．5或1ml于培养皿中。 3. 以无菌操作把无菌CaCO3 加入融化了的MRS培养基 中，于自来水中迅速冷却培养基至45℃左右。轻摇使 CaCO3混均，但不得产生气泡。立即倒入培养皿中，摇 匀。 4. 待培养基凝固后，倒置放于40℃和30℃恒温箱中培 养（酸牛乳样品在40℃下培养；酸泡菜汁样品在30℃ 下培养）