流动相先经过脱气装置再输送到色谱柱。
(3) 进样装置 ①注射器进样装置
②高压定量进样阀(六通阀)
(4) 色谱柱-高效分离柱
柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm,柱长5～40 cm。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
一般在分离前备有一个前置柱
(5) 液相色谱检测器
紫外检测器 示差折光检测器
淋洗过程
2.色谱分析法分类
气相色谱法 色 谱法
液相色谱法
气-液色谱法
气-固色谱法 液-固色谱法 液-液色谱法
其他色谱方法
薄层色谱和纸色谱 离子色谱：以特制的离子交 换树脂为固定相，不同pH值的 水溶液为流动相。 凝胶色谱法
4.色谱法的特点 (1)高选择性 、(2)高效能、 (3)高灵敏度 可以分析质量分数为10-6～10-9数量级、检出限量低至 10-1l g的物质，适于微量和痕量分析。 5.色谱法的应用 (1)色谱分析广泛应用于极为复杂的混合物成分分析； (2)液相色谱法，在糖类、氨基酸、农药、染料、贵金属、 有机金属化合物等方面得到了广泛的应用。 (3)色谱分离是一种非常有效的提纯物质的技术，常用于 制备分离，得到高纯样品。
二、流程及主要部件
1.检测系统 记录仪
2.主要部件
(1) 高压输液泵 (2) 在线脱气装置 (3) 进样装置 (4) 色谱柱 (5) 检测器
(1) 高压输液泵 动力元件 常用的输液泵分为恒流泵和恒压泵两种。
(2)在线脱气装置 在线脱气装置用于脱去流动相中的溶解气体，
在一定分析周期内不断变换流动相的种类和比例 适于分析极性差别较大的复杂组分。
3. 柱温 可控，一般选室温25℃左右。
流动相的选择原则： (1)应具有足够的纯度，一般选用色谱纯试剂。 (2)流动相与固定液应互不相溶。 (3)流动相对试样各组分应有适当的溶解度。 (4)粘度小。 (5)检测器对流动相不产生响应。
2. 色谱分离原理
试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在色谱柱 中的两相间不断进行着的分配过程。在一定温度下，组分 在固定相和流动相间分配达到平衡时的浓度比，称为分配
系数，用K 表示，即：
K

组分在固定相中的浓度 组分在流动相中的浓度
cs cM
分配系数是色谱分离的依据。
色谱分离
慢 中等
快
淋洗液
R=0.8：两峰的分离程度可达89%； R=1：分离程度98%； R=1.5：达99.7%（相邻两峰完全分离的标准）。
色谱法研究的核心：
选择最适合的色谱体系和条件，在最短的时 间达到最佳的分离效果。
高效液相色谱分析法
流程及主要部件 主要类型 操作条件的选择 操作步骤与定性、定量分析
◆紫外光度检测器（UV）：
可变多波长检测器：氘灯做光源，光栅分光 光二极管阵列检测器（PDA）：钨灯和氘灯组合光源 优点：这种检测器对温度和流速不敏感，适宜于梯度洗脱。 缺点：不能用于对紫外-可见光完全不吸收的试样。
◆ 示差折光检测器
●一种浓度型检测器，是通过连续测定测量池中溶液折 射率的变化来测定组分的浓度。溶液的折射率等于溶剂 及其中所含各组分溶质的折射率与其各自的摩尔分数的 乘积之和。 ●优点：凡与流动相折射率不同的组分，都可以用差示 折光检测器来检测，所以差示折光检测器是一种通用型 检测器。灵敏度可达10-7g·mL-1。 ●缺点：对温度和流速的波动很敏感。
非极性
流动相 非极性
极性
反相色谱适用于弱极性或非极性化合物的分离。 其流出顺序是极性大的先流出，极性小的后流出。
四、液相色谱柱分离条件的选择
1. 流动相的流量、性质和极性 采用二元或多元组合溶剂作为流动相 （甲醇，乙腈）色谱纯 使用前过滤、脱气
2．洗脱方式 1）等度洗脱（恒组成溶剂洗脱） 2）梯度洗脱：
(4)色谱—质谱联用仪已成为研究分子结构的重要手段。
6、色谱常用术语
①基线：纯流动相经过检测器时,检测到的信号,体现系统 的稳定情况。 ②色谱峰的高度、宽度、半峰宽度（h、Y 、Y1/2） ③保留值（保留时间tR ，死时间t0 ，调整保留时间tR′） ④峰面积
⑤相对保留时间. 2,1
相对保留值r21
反相色谱最常用的流动相： 水、甲醇、乙腈、四氢呋喃、异丙醇等。 水－甲醇体系：大约50％水的时候粘度最大 水－乙腈体系：35％水的时候粘度最大。
五、操作步骤与色谱的定性、定量分析
1、操作步骤 首先是进行分析中所用各种标准液、试样液、
混合液等的配制及流动相的配制（过滤、除气）； 二进行色谱系统的选择及有关参数的确定；三进行 进样分析测定；最后是计算并出具报告。
2、色谱的定性、定量分析 高效液相色谱法的基本概念、理论基础及其常
用的定性、定量分析方法与气相色谱法相同。
六、高效液相色谱法的应用和进展
1、在生物化学和生物工程中的应用 2、在医药研究中的应用 3、食品分析 4、环境分析 5、精细化工
1.色谱分析法简介 2.色谱分析法原理 3.色谱分析法分类 4.色谱分析法特点 5.色谱分析法应用 6.色谱常用术语
1.色谱分析法简介
色谱法，也称层析法、层离法。 色谱法是混合物最有效的分离、分析方法， 利用混合物中各组分的物理化学性质的差异（如 吸附作用、分配作用、电离作用等），使各组分 以不同程度分布在两相中: 其中的一相固定不动，称为固定相； 另一相是流动的，称为流动相。 当流动相流过固定相时，各组分以不同的速 度移动，从而达到互相分离。
组分2与组分1调整保留值之比： r21 = t´R2 / t´R1= V´R2 / V´R1
r21值越大，两组分的色谱峰相距越远，分离得越好； 用于定性分析。
分离效果的评价——分离度R
定义为两相邻组分保留时间之差与两峰底宽度 和之半的比值。
R tR,2 - t R,1 1/ 2 (Y1 + Y2 )
三、液一液分配色谱法（LLPC）
1.分离原理
K c固 c液
K值大的组分，保留时间长，后流出色谱柱。
2.固定相
使固定液与担体之间形成化学键，常用的是在硅胶表面 利用硅烷化反应，形成Si—O—Si—C型键。如十八烷基键合 硅胶柱（简称碳十八柱，ODS柱）
3. 流动相
正相色谱 反相色谱
固定相 极性