流式细胞仪
1，使用特定的方法诱导细胞凋亡，设置一个没有处理的control组
2，在一定孵育期后收获细胞，用冰冷的PBS清洗
3，准备1X的annexin结合液，例如，对于10个实验来说，加1ml 5X annexin 结合液（组分C）到4ml 去离子水中
4，准备一个100ug/ml的PI工作液，例如，通过稀释5ul 1mg/ml的PI储存液（组分B）到45ul 1X annexin 结合液中。

没有使用的这部分工作液用于以后的实验。

5，再次离心2步骤中洗过的细胞，弃上清用1X annexin 结合液重悬。

调整细胞密度，用1X的annexin 结合液稀释到大约1x106/ml，为每个实验准备100ul 足够的体积。

6，加5ul Alexa Fluor 488 annexin V(组分A)和1ul 100ug/ml PI工作液（4步骤中准备的）到每100ul的细胞悬液中。

7，室温孵育细胞15min.
显微镜观察
1，使用特定的方法诱导细胞凋亡，设置一个没有处理的control组
2，在一定孵育期后收获细胞，用冰冷的PBS清洗
3，准备1X的annexin结合液，例如，配置1ml，加200ul 5X annexin 结合液（组分C）到800ul去离子水中
4，准备一个100ug/ml的PI工作液，例如，通过稀释5ul 1mg/ml的PI储存液（组分B）到45ul 1X annexin 结合液中。

没有使用的这部分工作液用于以后的实验。

5，再次离心2步骤中洗过的细胞，弃上清用1X annexin 结合液重悬。

调整细胞密度，用1X的annexin 结合液稀释到大约1x106/ml，为每个实验准备足够的体积。

6，加5-25ul的annexin V缀合物（组分A）和1-2ul(100ug/ml)PI工作液到100ul 的细胞悬液中。

高浓度的annexinV缀合物会产生较好的结果；最佳染色浓度需要凭借经验
7，室温孵育细胞15min
8，1X annexin 结合液清洗细胞
9，用一个合适方法使细胞固定在载玻片上，用一个适当的滤镜观察荧光效果。

细胞应该被分成3组：活细胞，凋亡细胞和死细胞。

活细胞在细胞膜上有微弱的annexin V染色，而凋亡细胞在膜上有一个显著亮度，死亡细胞在膜上有annexin染色和核上的PI染色。