《基因工程》习题集
第一章基因工程概述
1.什么是基因工程，基因工程的基本流程？
2.基因工程诞生的条件与标志分别是什么？
3.简述基因工程的发展简史。

4.基因工程有哪些主要应用？
5.通过本章的学习，请举两个基因工程应用的具体例子并加以简单说明。

第二章基因工程的载体和工具酶
1. 基因工程载体必须满足哪些基本条件？
2. 质粒载体有什么特征，有哪些主要类型？
3. 噬菌体载体有哪些？携带能力分别有多大？
4. 什么是人工微小染色体？有哪些类型？
5. 什么是穿梭载体？
6. 表达载体应该具备什么条件？
7. 限制性内切核酸酶的特点与使用注意事项有哪些？
8. DNA聚合酶和Klenow大片段各有什么作用？
9. DNA连接酶在什么情况下使用？如何将不同DNA分子末端进行连接？
10. 碱性磷酸酶有什么作用？
11. 末端脱氧核苷酸转移酶有哪些作用？
12. 在基因工程研究和应用中，为什么必须使用载体来克隆外源DNA片段？
13. 分析影响限制性内切核酸酶酶切的因素有哪些？
14. 举例说明大肠杆菌DNA聚合酶Ι在基因工程中的应用。

15. 请描述用载体pUC18来克隆DNA片段的过程。

在这个克隆实验中，你怎样选择含有克
隆片段的重组子？
第三章基因工程的常规技术
1. 琼脂糖凝胶电泳的原理是什么
2. 琼脂糖凝胶电泳的影响因素有哪些？
3. 探针有哪些类型？探针标记有哪些方法？
4. 探针的间接标记有什么优点？什么是ABC荧光（显色酶）标记法？
5. Southern杂交的基本原理、流程与主要目的分别是什么？
6. Northern杂交的基本原理、流程与主要目的分别是什么？
7. Western杂交的基本原理、流程与主要目的分别是什么？
8. 菌落（嗜菌斑）原位杂交的基本原理、流程与主要目的分别是什么？
9. 简述PCR技术的基本原理。

10. PCR反应体系的主要成分与主要程序是怎样的？
11. 提高PCR反应特异性的因素有哪些？
12. 什么是逆转录PCR？
13. 什么是反向PCR?
14. 什么是多重PCR？
15. 什么是荧光定量PCR？
16. 什么是基因芯片技术？
17. DNA芯片有哪些主要的应用？
18. 什么是蛋白质芯片？
19. 什么是基因组文库？其构建方法是怎样的？
20. 什么是cDNA文库？它的构建流程是什么？
21. 构建cDNA文库需要用到哪些工具酶？
22. 合成cDNA第二条链有哪些方法？
23. 简述酵母双杂交系统的基本原理。

24. 酵母双杂交系统有哪些应用？
25. Sanger双脱氧链终止法DNA测序的基本原理是什么？
26. Maxam-Gilbert化学修饰法测序的基本原理是什么？
27. DNA自动测序的基本原理是什么？
28. PCR扩增一个500bp大小的DNA片段，若用凝胶电泳检测，用多大浓度的琼脂糖凝胶？
29. 试述DNA切口平移标记探针的原理。

30. 试述PCR技术的基本原理，如果想通过PCR技术扩增，然后在大肠杆菌中克隆一个约
500bp的DNA片段，请描述其克隆过程。

第四章基因在大肠杆菌、酵母的高效表达
1. 简要分析基因的表达系统的组成。

2. 基于T7噬菌体RNA聚合酶/启动子的大肠杆菌表达系统的主要优点是什么？
3. 蛋白质的融合表达的原理是什么？
4. 蛋白质融合表达的优缺点是什么？
5. 试述蛋白质的分泌型表达的原理。

6. 蛋白质分泌表达的优缺点有哪些？
7. 蛋白质的包含体形式表达的概念。

8. 蛋白质包含体表达的优缺点有哪些？
9. 蛋白质包含体复性的方法有哪些？
10. 利用大肠杆菌表达系统如何表达人胰岛素？
11. 酵母表达系统有哪些优缺点？
12. 简述甲醇酵母表达系统的主要特点。

13. 组织纤溶酶原激活剂在甲醇酵母中的表达过程是怎样的？
14．查阅载体pET42a的结构图，以载体pET42a、宿主菌BL21（DE3）为例，简述作为一个良好的表达载体需要具备哪些条件？影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素有哪些？
15．目的基因在大肠杆菌种表达时，为什么常用融合蛋白的表达方式？哪些蛋白或多肽可以用作担体序列？各有什么特点？
16．简述包含体形成的原因和蛋白质折叠复性的主要方法。

17．简述几种常用甲醇酵母载体的特点和其转入甲醇酵母后的筛选、鉴定方法。

18．列表比较大肠杆菌、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞表达系统得优、缺点。

19．自选一种新型的有药用价值的细胞因子，提出基因克隆、蛋白质表达与纯化、生物活性测定的实验研究方案。

第五章转基因植物
1. 植物细胞培养技术有哪些？
2. 植物转基因技术的基本路线是什么？
3. 植物转基因的受体系统有哪些？
4. 外源基因导入植物的方法有哪些？
5. 简述Ti质粒的结构特点。

6. 请阐述Ti质粒介导植物基因转移的过程。

7. 植物转基因载体的报告基因有哪些？
8. 提高外源基因在植物体内表达水平的策略有哪些？
9. 什么是抗虫转基因植物？
10. 什么是抗病毒转基因作物？
11. 什么是抗细菌和真菌的转基因作物？
12. 什么是抗除草剂转基因作物？
13. 什么是抗非生物胁迫的转基因作物？
14. 什么是植物生物反应器？
15. 什么是转基因生物的安全性？
16. 转基因生物安全性的主要影响因素有哪些？
17．什么是Ti质粒载体，其介导的植物转基因原理如何？
18．什么是基因沉默，导致转基因发生失活的原因有哪些？19．转基因植物作为生物反应器的优势在哪里？
20．谈谈你对转基因植物的安全性的认识。

第六章转基因动物
1. 什么是转基因动物？
2. 显微注射法制备转基因动物的主要过程是什么？
3. 逆转录病毒法制备转基因动物的主要过程又是怎样的？
4. 胚胎干细胞的概念。

5. 什么是精子载体法？其制备转基因动物的主要优点是什么？
6. 什么是体细胞核移植法？主要流程是什么？
7. 什么是动物器官生物反应器？
8. 转基因动物有哪些应用？
9. 转基因动物在医药科学研究中的应用有哪些？
10．转基因小鼠的鉴定方法有哪些？
11. 显微注射法制备转基因动物需要哪些设备与装置？
12. 逆转录病毒的结构与基因组特点是怎样的？
13. 基因敲除的概念与操作流程是什么？
14. 简述胚胎干细胞制备转基因动物的流程。

15．什么是ES细胞？它在转基因动物中的应用如何？
16．请举几个动物转基因的方法。

17．比较在细菌、真核细胞和动物个体中表达外源基因的优缺点。

18．谈谈你对转基因动物的安全性问题的认识。

第七章基因治疗
1. 基因治疗的概念与策略是什么？
2. 基因治疗的基本程序是怎样的？
3. 基因治疗的载体有哪些类型？
4. 腺病毒载体有什么优点？
5. 什么是体外基因治疗？
6. 什么是体内基因治疗？
7. 用于基因治疗的目的基因必须满足哪些条件？
8. 选择基因治疗的靶细胞必须注意哪些问题？
9. 肿瘤的基因治疗的策略有哪些？
10．什么是自杀基因治疗？
11．什么是耐药基因治疗？
12. 什么是反义核酸技术？
13. 什么是RNA干涉技术？
14．基因治疗的病毒载体应该具备哪些基本条件？简述几种常见的病毒载体系统并比较其优缺点。

15．查阅文献，简述单基因遗传病——进行性肌营养不良和多基因遗传病——先天性心脏病的发病机制和基因治疗策略。

16．针对肿瘤的基因治疗有哪几种主要途径？试对每种途径各举一例进行说明。

17．利用RNA水平上的一些技术对HIV进行基因治疗有哪些方法？对丙型肝炎病毒（HCV）和SARS冠状病毒的基因治疗方法有哪些呢？
18．评述基因治疗的发展前景。

第八章蛋白质工程
1.蛋白质工程的概念。

2.蛋白质结构层次。

一级结构、二级结构、三级结构与四级结构的概念。

3.结构域与模体的概念。

4.蛋白质一级结构预测的方法有哪些？
5.蛋白质加工修饰的类型有哪些？
6.什么是定点突变？原理是什么？
7.盒式突变的概念。

8.什么是定向进化？
9.什么是易错PCR?
10.DNA改组的概念。

11．列表比较几种定点突变方法的优缺点。

12．碱性磷酸酶在ELISA诊断等领域有广泛的应用。

为提高碱性磷酸酶的活性，请设计其定向进化的实验方案。

13．查阅文献，评述绿色荧光蛋白（GFP）的蛋白质工程研究进展和发展趋势。